实验 02、有丝分裂染色体制片及观察原理 2 步骤 1 注意 1 二、实验原理2 有丝分裂是一个连续过程，可分为分裂间期和分裂期，分裂期又分为前期、中期、后期、末期。植物细胞有丝分裂主要在根尖、茎间、芽的生长点、幼叶叶缘及茎间形成层等分生组织，将生长旺盛的植物分生组织经过取材、固定、解离、染色、压片等处理，就可以观察到植物细胞的有丝分裂现象。由于植物根尖容易取材、操作方便，经常被用来进行植物细胞有丝分裂过程的观察：①根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且可以大量获得；③对于某些珍贵而又稀少的试验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、 花器等对材料的伤害要小得多；④采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。五、实验方法 1 1.发根：①水培法②砂培法取材：上午 10:00～11:00；下午 4:00～ 5:00 2.预处理 ：将剪下的根尖立即放入0.1％秋水仙碱水溶液中， 以药液浸没根尖为度， 处理 3～4h。抑制和破坏纺锤丝的形成， 使根尖细胞延迟其染色体的分离，增加中期分裂相， 并使染色体分散于细胞中，以便观察计数。3.固定材料经预处理后用流水冲洗，然后投入卡诺液(3 份甲醇 :1 份冰乙酸，现配现用 )中固定 20～24h，用 95％的乙醇洗两次，转入70％乙醇中保存备用。固定的目的是将材料迅速杀死，并使染色体形态、结构尽可能保持不变和便于染色。4. 解离常用酸解法：从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗3min→吸水纸吸干→放入盛有适量1mol/L HCl ，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离10min。5.染色与压片（改良石炭酸品红染色）：解离后材料水洗 3min 并吸干，取 1/2 个根尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色 10～15min，将滤纸放在盖玻片上，用拇指用力压盖玻片，再用手固定住盖玻片，同时用铅笔的橡皮头在材料部位垂直轻敲几下，使材料分散均匀。6.镜检通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少数，因此压片后要认真仔细地进行镜检。先在低倍镜下寻找有分裂相的视野，再用高倍镜仔细观察、记数或拍照。调节可变光栏与反光镜，使光线明暗合适，视场亮度适中。注意观察有丝分裂全过程的染色体形态变化，找出染色体分散好的中期细胞进行染色体计数，对好的分裂图像作上标记，以便再观察。七、注意事项1...
