00YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质DNA与RNA的差异DNARNA固体白色纤维状大多为线形分子细长溶液粘度大与酸和二苯胺共热产生蓝紫色白色粉末状分子量较DNA小的多溶液粘度小能在室温条件下被稀碱水解成核苷酸（利用此性质测定RNA碱基组成和除去溶液RNA杂质）与浓盐酸和苔黑酚共热产生绿色YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质核酸的物理化学性质核酸的化学结构和作为高聚物大分子决定着其物理化学性质核酸的糖苷键和磷酸二酯键可被酸、碱或各自相应的核酸酶水解成为各种成分，其水解程度因水解条件而异核酸和核苷酸既有磷酸基团，又有碱性基团，都是两性电解质——酸碱性质DNA和RNA都微溶于水，不溶于有机溶剂，提取分离核酸时，可用乙醇将核酸从溶液中常沉淀出来核酸的紫外吸收特性因其所含碱基而引起核酸的变性与复性与其双螺旋结构有关。YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质一、核酸的水解二、核酸的酸碱性质三、核酸的紫外吸收性质四、核酸的变性、复性及杂交核酸的物理化学性质YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质一、核酸的水解（一）酸水解糖苷键比磷酸二酯键更易被酸水解嘌呤碱基的糖苷键比嘧啶碱基的糖苷键对酸更不稳定ÌÇÜÕ¼üõ¥¼üÏÙÜÕËáNNNN9NH2OOHOHHHHCH2H1'2'OPO-HOO5'YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质（二）碱水解RNA的磷酸酯键易被碱水解，产生核苷酸。是由于RNA的核糖上有2’-OH基，在碱作用下形成磷酸三酯。磷酸三酯极不稳定，随即水解产生，产生2’,3’-环磷酸酯，再水解成2’-核苷酸3’-核苷酸KOH较好。水解后用HCIO4中和，由于KCIO4溶解度较小，溶液中大部分K+即被除去。ÌÇÜÕ¼üõ¥¼üÏÙÜÕËáNNNN9NH2OOHOHHHHCH2H1'2'OPO-HOO5'相对而言DNA一般对碱稳定。YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质（三）酶水解非特异性——磷酸二酯酶5´ppppOHBpppp3´BBBBBBB牛脾磷酸二酯酶（5´端外切5得3）蛇毒磷酸二酯酶（3´端外切3得5）5´3´结构式5'-核苷酸3'-核苷酸YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质核酸酶的分类（1）底物RNaseDNase（2）按作用方式核酸内切酶核酸外切酶（5’→3’外切酶、3’→5’外切酶）（3）按断裂磷酸二酯键的方式（4）其他：双链酶、单链酶专一性水解磷酸二酯键——核酸酶YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质有些核酸酶的特异性很高，能识别和切割DNA的特异序列，是重要的工具酶核糖核酸酶通常不能识别RNA的序列特异的RNase可以识别RNA的空间结构，在RNA的特定位点进行切割，并常需要小RNA（smallRNA,sRNA）的帮助YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质二、核酸的酸碱性质1、碱基的解离2、核苷的解离3、核苷酸的解离YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质1、碱基的解离胞嘧啶主要N3的解离YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质DNA嘧啶碱基的解离尿嘧啶胸腺嘧啶YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质DNA嘌呤碱基的解离腺嘌呤YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质鸟嘌呤的解离YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质2、核苷的解离糖存在影响了碱基的解离——增强了碱基的酸性解离°ûà×ऺËÜÕÄòà×ऺËÜÕÄñàÑßʺËÜÕÏÙàÑßʺËÜÕNNOHHONNNH2HONNOHH2NNNNNNNNH2OHHOHHOHHHOCH2HOCH2OHHOHHOHHOHHOHHOHHHOCH2OHHOHHOHHHOCH2YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质3、核苷酸的解离表14-1（重在看懂、理解）YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质HHHpKa4.15YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质多核苷酸中磷酸二酯键中的磷酸基团只有一个解离常数YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质4、核酸的滴定曲线图14-2小牛胸腺DNA的滴定曲线反映出天然DNA与变性能DNA的滴定曲线是不同的碱基的暴露II从pH12或pH2.5分别反向滴定I从pH6.9用酸或碱正向滴定YOURSITEHERE第14章核酸的物理化学性质由于核酸分子中的磷酸是一个中等强度的酸，而碱性（氨基）是一个弱碱，所以核酸的等电点比较低。如DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电...
