1/9蛋白质与多肽提取分离1 分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括：盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化，同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段，如层析、叫泳等。1.1 高效液相色谱(HPLC)HPLC 的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段，因为蛋白质、多肽的 HPLC 应用与其它化合物相比，在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的，更重要的是 HPLC 能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上，不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。1.1.1 反相高效液相色谱(RP-HPLC)结果与保留值之间的关系：利用 RP-HPLC 分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数，Wilce 等利用多线性回归方法对 2106 种肽的保留性质与结构进行分析，得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系，其中极性氨基酸残基在 2〜20 氨基酸组成的肽中，可减少在柱上的保留时间；在 10〜60 氨基酸组成的肽中，非极性氨基酸较多也可减少在柱上的保留时间，而含 5〜25 个氨基酸的小肽中，非极性氨基酸增加可延长在柱上的保留时间。同时有不少文献报道了肽链长度、氨基酸组成、温度等条件对保留情况的影响，并利用计算机处理分析得到每种多肽的分离提取的最佳条件。肽图分析(PeptideMapping)：肽图分析是根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶［一般未肽链内切酶(endopeptidase)］作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片断，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱，肽图分析对多肽结构研究合特性鉴别具有重要意义。利用胰蛋白酶能特意性作用于 Arg 和 Lys 羧基端的肽链的性质，通过 RP-HPLC 法采用 C18 柱检测了重组人生长激素特征性胰肽图谱。同时胰岛素的肽图经 V8 酶专一裂解也制得，并可鉴别仅相差一个氨基酸残疾的不同种属来源的胰岛素。人类肿瘤坏死因子的单克隆抗体结构也应用酶解法及在线分析技术确定了肽图，便于鉴定分析。此项技术已经在新药开发中得到广泛应用。1.1.2 疏水作用色谱(Hydrophobicinteractionchromatogrphy,HIC...
