WesternBlot蛋白免疫印迹法VIP专享

3 Western blot3.1 试剂配制1）30%聚丙烯酰胺储备液（Acr/Bis）：丙烯酰胺（Acr），29g；N,N-亚甲基双丙烯酰胺（Bis），1g，去离子水溶解，37℃水浴助溶，定容至 100mL。0.45μ m 滤器过滤，棕色瓶 4℃避光保存。2）10%十二烷基硫酸钠（SDS）：SDS，10g；H2O，80mL。68℃加热溶解，浓 HCl 调 pH 至 7.2，定容至 100mL，室温保存。3）10%过硫酸铵（AP）：AP，1g；H2O，10mL。避光，4℃保存。（4℃2 周）4）分离胶缓冲液（1.5MTris-HCl pH8.8）：Tris，18.17g；H2O 80mL。用浓 HCl 调 pH 至 8.8，定容至 100mL，4℃保存。5）浓缩胶缓冲液（1.0MTris-HCl pH6.8）：Tris，12.11g；H2O 80mL。用浓 HCl 调 pH 至 6.8，定容至 100mL，4℃保存。6）电泳缓冲液（10×）：甘氨酸（Glycine），188g；Tris 30.2g；SDS，10g；H2O，800mL。调节 pH 至 8.3，定容至 1L，4℃保存（用时稀释为 1×）。7）5×SDS-PAGEloadingBuffer（5mL）：1MTris-HCl（pH6.8），1.25mL；SDS，0.5g；溴酚蓝（BPB），25mg；甘油，2.5mL；加去离子水定容至 5mL。充分混匀，分装成 500μ L/份，室温保存。使用前每份加入 25μ Lβ -巯基乙醇（2-ME），加入 2-ME 的 loading buffer 可在室温下保存一个月左右。8）考马斯亮蓝染色固定液：40%双蒸水, 10% 醋酸, 50%甲醇，室温保存9）考马斯亮蓝染色液：考马斯亮蓝 R-250，250mg；甲醇，45ml；冰醋酸，10ml；H2O，定容至 100ml。室温保存。10）考马斯亮蓝染色脱色液：醋酸，100ml；乙醇，50ml；dH2O 850ml，充分混合，室温保存11）膜转移缓冲液：甘氨酸，2.9g；Tris，5.8g；SDS，0.37g；加 H2O 600mL 充分溶解，加 200mL甲醇，混匀，定容至 1L，室温保存。12）TBS 缓冲液：NaCl，8.8g；1M Tis-HCL(pH 8.0)，20ml，加入约 800 H2O 搅拌溶解，定容至 1L，4℃保存。13）TBST 缓冲液：NaCl，8.8g；1M Tis-HCL(pH 8.0)，20ml，加入约 800 H2O 搅拌溶解，加入 0.5 mlTween 20 后充分混匀，去离子水定容至 1L，4℃保存。14）1M Tis-HCL(pH 8.0)：Tris 121.1g 置于 1L 烧杯，加入约 800ml 去离子水，充分搅拌，加入浓 HCL 约42ml ，定容至 1L，高压灭菌，室温保存。3.2 Western blot 电泳、转膜及显色过程3.2.1 清洗将玻璃板洗净，用 ddH2O 冲洗，然后晾干。封板时保证支架与底座胶条契合，固定时两边同时均匀用力旋动齿轮把手，固定即可，不要用力...