细胞凋亡周期VIP免费

细胞生命活动之--细胞凋亡、细胞周期细胞凋亡（Apoptosis）概念为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序死亡。是机体主动、高度有序清除无用细胞过程。是生物体中一种普遍存在的现象。与细胞坏死(Necrosis)相区别，坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。细胞凋亡与疾病细胞增殖细胞凋亡生与死的平衡癌症自身免疫长期感染I型糖尿病神经退行性疾病：老年痴呆、帕金森氏症、亨廷顿氏症等心肌梗塞艾滋病细胞凋亡多事件发生1细胞凋亡之细胞膜事件磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是一种细胞膜活性物质，正常细胞中，其位于细胞膜脂质双层内侧,在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面。细胞凋亡之细胞膜事件早期凋亡特征：•磷脂膜(PS)外翻，但是细胞膜保持完整性，因此PI染色为阴性•DNA没有发生断裂AnnexinV-FITCPI早期凋亡PS检测及结果判定经典明星产品产品编号产品名称包装规格品牌4830-01-KAnnexinV-FITCApoptosisDetectionKit100TestsR&DK101AnnexinV-FITCApoptosisKit25T/100T/400TBiovision130-092-052AnnexinV-FITCKit100Tests美天旎556547AnnexinVFITCApoptosisDetectionKit100TestsBD559763AnnexinVPEApoptosiskit100TestsBD细胞膜变化的检测：AnnexinV/PI优点：简便、快速、准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞样本设置：1.空白对照：辅助判断管，即不加AnnexinV/PI，但用它调电压的话，电压偏高，即根据它确定的阴阳性界限是偏低的。2.阴性对照：未诱导的，AnnexinV/PI双染，细胞绝大部分都在双阴性区域，用它来确定两荧光通道的电压，这是为了排除非特异性结合。3.单阳样本：诱导凋亡，AnnexinV单染，用来调补偿4.单阳样本：诱导凋亡，PI单染，用来调补偿注意事项：1.细胞制备或储存时细胞膜损伤，造成假阳性2.贴壁细胞消化时避免使用EDTA，螯合钙离子FAQ常见问题回复1.是否AnnexinVKits可以检测小鼠或其他物种?AnnexinV试剂盒可以检测多种属2.这个试剂盒是否可用于贴壁细胞、固定或冻存的细胞、或组织?No.上述样本的细胞细胞膜都会或多或少受到损害，这样的样本建议用免疫荧光技术3当样本表达GFP（绿色荧光蛋白），还能使用Annexin-FITC吗？FAQ常见问题回复推荐使用AnnexinV-APC/7-AAD染色4.贴壁细胞酶消化，应注意哪些事项？0.25%胰酶消化：过渡消化损伤细胞，可在消化时加2%BSA防过渡消化胰酶含EDTA(钙离子螯合剂）：标记AnnexinV前用1xPBS或1xbindingbuffer洗脱，清除EDTA,以免螯合钙离子，影响AnnexinV结合5.是否与细胞表面标记兼容?只要Ca离子不影响该表面Marker就可以同时做FAQ常见问题回复2细胞凋亡之线粒体Fluo-3-Am为高度特异性Ca2+荧光指示剂，是膜通透性染料，可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化Fluo-3-Am本身荧光弱，进入细胞后经非特异性酯酶脱去Am酯，成为脂溶的Fluo-3留在细胞内，当Fluo-3与细胞内游离钙结合后产生较强荧光。FLUO-3/AM检测钙离子流：凋亡早期，线粒体膜内钙离子外流到胞浆，细胞膜外钙离子内流。产品编号产品名称包装规格品牌84024Fluo-3,AM1mgAnaspec84026Fluo-3,AM50ugX20AnaspecSc-211521Fluo-31mgSantaCruz73881Fluo3-AM1mgSigma线粒体事件JC-1检测线粒体膜电位变化（JC-1是一种阳离子脂质荧光染料）原理：JC-1有有单体和多聚体两种存在形式，高浓度时多聚体，发红色荧光（FL2检测），低浓度时单体形式，发绿色荧光（FL-1检测）。正常细胞：膜电位正常，JC-1靠线粒体膜极性进入线粒体内，随浓度升高多聚体，红光凋亡细胞：线粒体膜电位去极化，JC-1从线粒体释放，浓度降低，转为单体，绿光通过检测绿色和红色荧光：流式检测结果定性(细胞群的偏移）定量（细胞群的荧光强度）检测线粒体膜电位的变化优点：操作简单，试剂直接加入细胞中，20分钟后检测产品编号产品名称包装规格品牌88060JC-15mgAnaspecSC-364116JC-11mgSantaCruz551302JC-11mgBD1130JC-15mgBiovision3细胞凋亡之caspase检测•背景知识–细胞凋亡过程中，胞内主要蛋白通常被降解，调节这一过程的蛋白叫做Caspase（半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶）–Caspase3是参与DNA维护和调控细胞的重要组分，即Caspase3激活...