分子生物学大题

分子生物学大题一、原核生物和真核生物基因组各自的特点：原核生物基因组： 1.基因组通常仅由一条环状双链 DNA 分子组成； 2.结构基因与调控序列以操纵子的形式组织在一起； 3.基因组中重复序列很少； 4.结构基因多为单拷贝； 5.基因是连续的； 6.编码序列一般不会重叠； 7.编码区在基因组中所占的比例远远大于真核基因组而小于病毒基因组； 8.细菌基因组中存在可移动 DNA 序列。真核生物基因组： 1.DNA 为双链线状且往往不是一条； 2 结构基因为.断裂基因，并受一系列顺式作用元件调控； 3.结构基因转录产物为单顺反子； 4.非编码序列远多于编码区； 5.含有大量重复序列和基因家族； 6.DNA 末端具有端粒结构； 7.还包括细胞器基因组。二、核酸分子杂交技术1. Southern 印迹（检测 DNA）首先通过限制性核酸内切酶降解样品中 DNA，再经凝胶电泳分离，将分离后的 DNA 片段从凝胶转移到硝酸纤维素薄膜等上并固定，再用标记过的探针进行杂交，以检测目的DNA。2.Northern 印迹（检测 RNA）应用 DNA 探针检测特异 mRNA 的一种杂交技术，主要用于分析 mRNA 的转录或 mRNA 分子大小。其方法类似于 Southern 印迹杂交。3.Western 印迹（检测蛋白质）将待检测蛋白质（或酶）经 PAGE 电泳并染色后，转移到滤膜上固定，再用“抗体-抗原”免疫反应或“DNA-protein”结合反应鉴别滤膜上的蛋白质。三、PCR 扩增技术1.基本原理：DNA 的半保留复制。2.反应体系的基本成分：（1）模板：包括 DNA 和 RNA。（2）特异性引物：是一段与模板 DNA 链互补的寡核苷酸片段。（3）热稳定的 DNA 聚合酶：耐热的 Taq DNA 聚合酶。（4）dNTP：包括 dATP、dGTP、dTTP、dCTP。（5）二价阳离子：常用 MgCl，调节 DNA 聚合酶活性，影响引物退火、PCR 的特性。（6）缓冲液：一般使用 Tris-Cl，调节 pH 值，使反应体系偏碱性；（7）一价阳离子：一般为 KCl，促进引物退火，高浓度 KCl 抑制 Taq DNA 聚合酶活性。3.基本操作：（1）变性将待扩增的模板 DNA 加热到 94℃，使双链 DNA 解链为单链。（2）退火将温度下降至 55℃左右，引物与变性的模板 DNA 利用碱基互补配对结合。（3）延伸在 72℃下，DNA 聚合酶在合适的缓冲溶液中，以 dNTP 为底物，严格按照模板链碱基序列合成互补链，即从引物的 3’-OH 进行循环，合成方向为 5’-3’。以上三步骤为一次循环，每循环一次，DNA 分子按指数增加，经多...