第二节 分子生物学技术学习导航明目标、知重点难点尝试 PCR(多聚酶链式反应)技术的基本操作。(重、难点)体验 PCR 这一常规分子生物学实验方法。(难点)理解 PCR 的原理，讨论 PCR 技术的应用。(重点) [学生用书 P56])一、阅读教材 P83分析使用 PCR 仪的安全措施1．严禁在 PCR 仪运行过程中打开池盖，否则会造成仪器的永久损坏。2．仪器运行时，样品池及池盖内表面温度较高，当心灼伤。3．仪器运行时，加热器内腔为高温、高压环境，严禁触及。4．仪器运行过程中如果发出尖锐的刺刮声音，请立刻停止运行，检查是否有微量离心管断裂等故障。5．仪器运行过程中如果没有反应，请切断电源，进行检查。6．必须保持样品池内部的清洁，可用蘸有体积分数为 95%的酒精棉签擦拭相关部位。7．仪器必须放置在 PCR 实验室 里，操作者在操作的时候必须遵循 PCR 实验室的相关规定，做好穿防护服、戴防护手套等相关防护措施。8．当仪器接通电源后，打开外壳或移走部件可能会造成人员伤害，因此，在进行任何调整、替换、保养或维修之前，请切断所有的电源。二、阅读教材 P84完成多聚酶链式反应程序1．物质准备：向离心管中加入模板 DNA 、引物和 4 种脱氧核苷酸以及 Taq DNA 聚合酶 。2．变性：在 94 ℃高温下，作为模板的双链 DNA 解旋为单链 DNA。3．退火(复性)：反应体系的温度降至 55 ℃，引物与单链 DNA 上的特定部位相互配对。4．延伸：反应体系的温度回升到 72 ℃左右，按照单链 DNA 上的脱氧核苷酸序列，4种脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则，在 TaqDNA 聚合酶的作用下连接到引物之后，使引物链延伸，形成互补的 DNA 双链 。三、阅读 P85～87分析目的 DNA 片段的体外扩增与鉴定1．DNA 片段的 PCR 扩增(1)准备器材：PCR 仪、台式高速离心机、0.2 mL PCR 微量离心管等。(2)在 0.2 mL PCR 微量离心管中加入 5_μL_10 倍浓缩的 PCR 缓冲液，4 种脱氧核苷酸 的溶液各 5 μL，1_μL 模板 DNA，5_μL 引物 1 和 5 μL 引物 2，29_μL 双蒸水。(3)煮沸 5_min 之后冰浴 2_min，低速离心，按照 1 单位/μL 加入 Taq DNA 聚合酶 。(4)扩增 DNA 片断的反应程序：将微量离心管放入 PCR 仪中，盖上样品池盖。在 94_℃的条件下预热 5 min，再设置反应程序为：94_℃，30_s→55_℃，30_s→72_℃，1_min(以上过程循环 30 次)。最后一次延伸条件为 72_℃，1_min。(5)按照 PC...
