1 实验一 动物组织蛋白质的提取 【目的要求】 1、掌握动物组织蛋白质的提取方法。 2、了解动物组织蛋白质提取的原理。 【实验原理】 由于蛋白质种类很多，性质上的差异很大，即或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质。蛋白质在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用，将细胞内蛋白质提取出来，并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些以可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化液等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。 本实验采用CWBio公司的蛋白抽提试剂盒（该试剂盒带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。）提取动物组织总蛋白。 【试剂器材】 动物组织、蛋白提取试剂盒、1.5 ml 离心管、-20℃储存的冰块 【操作步骤】 1、 动物肝脏直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次。 2、 称量约40mg研磨组织，加入200 ul预冷的组织蛋白抽提试剂，冰上孵育20分 2 钟。 3、 10,000×g 离心15分钟。 4、 收集上清，进行下一步的实验。 【注意事项】 在整个制备过程中使组织始终置于冰上，以防蛋白质的降解。 实验二 蛋白质的定量（BCA 法） 【目的要求】 掌握 BCA 法测定蛋白质含量的原理和方法。 【实验原理】 BCA（Bicincho ninic Acid）蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一，可对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与 Cu2+络合生成络合物，同时将 Cu2+还原成 Cu+。BCA ...
