DNA提取过程中所用试剂的机理

1.溶菌酶的作用机制是 溶菌酶是一种碱性球蛋白，分子中碱性氨基酸、酰胺残基和芳香族氨，酸的比例较高，酶的活动中心是天冬氨酸和谷氨酸。 溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的水解酶，称包胞壁质酶或 N-乙酰胞壁质聚糖水解酶，它专一地作用于肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸与 N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4 键，从而破坏细菌的细胞壁，使之松驰而失去对细胞的保护作用，最终使细菌溶解死亡。也可以直接破坏革兰氏阳性菌的细胞壁，而达到杀菌的作用，这主要是因为革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由胞壁质和磷酸质组成，其中胞壁质是由杂多糖和多肽组成的糖蛋白，这种多糖正是由 N-乙酰胞壁酸与 N-乙酰氨基葡萄糖之间的β-1，4 键联结的。对某些革兰氏阴性菌，如埃希氏大肠杆菌，伤寒沙门氏菌，也会受到溶菌酶的破坏。溶菌酶是母乳中能保护婴儿免遭病毒感染的一种有效成分，它能通过消化道而保持其活性状态，溶菌酶还可以使婴儿肠道中大肠杆菌减少，促进双歧杆菌的增加，还可以促进蛋白质的消化吸收。 简言之,破坏细菌细胞壁，由于细菌在 没 有细胞壁时 不 能生存 ，从而杀死细菌。 2. 十 二 烷 基磺 酸钠 （ Sodium dodecyl sulfate，SDS） 常 用于 DNA 提 取 过程 中使蛋白质变 性后 与 DNA 分开 。 SDS 是分离 DNA 时 常 用的一种阴离 子除 垢 剂 ，它有四 个 作用： a. 溶解膜 蛋白及 脂 肪 ，从而使细胞膜 破裂 ； b. 溶解核 膜 和核 小 体 ，使其解聚，将 核 酸释 放 出 来 ； c. 对 RNase、Dnase 有一定 的抑 制作用； d. SDS 能够 与蛋白质结合 形 成R1-O-SO3-…R2+-蛋白质复 合 物，使蛋白质变性沉 淀 。 质粒 提 取 常 见 问 题 1． 溶液 I—溶菌液 ： a.溶菌酶： 它是糖苷 水解酶，能水解菌体 细胞壁的主要化学 成分肽聚糖中的β-1,4 糖苷 键，因而具 有溶菌的作用。当 溶液 中pH 小 于 8 时 ，溶菌酶作用受到抑 制。 b.葡萄糖： 增加溶液 的粘 度 ，维 持渗 透 压 ，防 止 DNA 受机械 剪 切 力 作用而降 解。 C. EDTA ：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。 2．溶液 II－NaOH－SDS 液： NaOH：核酸在 pH 大于 5，小于 9 的溶...