Gateway 也 可 以 被 视 为 一 种 克 隆 操 作 平 台 ： 把 目 的 基 因 克 隆 到 入 门 载 体（ Entry Vector） 后 ， 就 不 用 依 赖 限 制 性 内 切 酶 ， 而 靠 载 体 上 存 在 的 特 定 重 组位 点 和 重 组 酶 ， 高 效 、 快 速 地 将 目 的 基 因 克 隆 到 其 它 的 受 体 载 体（ Destination Vector， 目 的 载 体 ） 上 。 Gateway 的 原 理 也 是 建 立 在 噬 菌 体DNA 定 点 整 合 到 细 菌 宿 主 基 因 组 上 。在 噬 菌 体 和 细 菌 的 整 合 因 子 （ INF、 Int） 的 作 用 下 ， lambda 的 attP 位 点 和 大肠 杆 菌 基 因 组 的 attB 位 点 可 以 发 生 定 点 重 组 ， lambda 噬 菌 体 DNA 整 合 到 大 肠杆 菌 的 基 因 组 DNA 中 ， 两 侧 产 生 两 个 新 位 点 ： attL 和 attR。 这 是 一 个 可 逆 的过 程 ， 如 果 在 一 个 噬 菌 体 编 码 蛋 白 Xis 和 IHF、 Int 的 共 同 介 导 下 这 两 个 新 位点 可 以 再 次 重 组 回 复 为 attB 和 attP 位 点 ， 噬 菌 体 从 细 菌 基 因 组 上 裂 解 下 来 。这 一 过 程 的 方 向 是 受 控 于 两 个 重 要 因 素 ： 存 在 的 介 导 蛋 白 和 重 组 位 点 。 在 Gateway 系 统 中 ,入 门 载 体 包 含 两 个 重 组 位 点 序 列 attL1 和 attL2，大 小 均 为 100bp， 中 间 夹 着 一 个 自 杀基 因 ——ccdB 基 因 。 由于 ccdB 基 因 的 表达产 物能抑制 普通的 E.coli 生 长， 在 克 隆 时没有切 开或者自 身环化的 载 体 在转化时不 能生 长。 在 构建 含 目 的 基 因 的 入 门 载 体 时必须切 掉这 个 基 因 ， 接入 目的 基 因 。 ccdB 基 因 两 端可 以 选择的 酶 切 位 点 有限 （ 2 个 ） ， 同 时还必须考虑读码 框 架 、 启 动 子 、 终 止 密 码 等 问 题 ， 因 此 Gateway 系 统 提 供 了 5 种 不 同 的 入 门载 体 以 供 选择。 需 要 特 别 注 意 的 是 转化用 的 菌 株 必须是 不 含 F 附...
