HPLC(液相色谱)常识及疑难详解(附实际操作图解)

1 液相色谱基础知识 1 .1 液相色谱名词术语 Mobile phase：流动相，在色谱柱中存在着相对运动的两相，一相为固定相，一相为流动相。流动相是指在色谱过程中载带样品（组分）向前移动的那一相。 Stationary phase：固定相，柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。 Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子 k 达到良好的分离目的。 Detection wavelength：检测波长， retention time：保留时间，被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间 Peak:峰 Peak Base：峰基线，经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴 Peak Height：峰高，色谱峰顶点至峰底的距离。 Peak Width：峰宽，色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离 Peak Width at Half Height：半峰高宽 Peak Area：峰面积 Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰 Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰 Ghost Peak: 假峰，并非由试样所产生的峰 Baseline Drift:基线漂移 Baseline Noise:基线噪音 Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象. 1.2 流动相 1.2.1 流动相类型 正相液相色谱流动相：一般正相色谱固定相极性大于流动相极性，采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），极性小的组分先出柱。 反相液相色谱流动相：一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物，极性大的组分先出柱（现在大部分液相用的是反相色谱法）。 1.2.2 流动相注意事项 1.2.2.1 pH 值的选择 C18 和 C8 使用的流动相pH 值通常为 2.5~ 7.5（2~ 8），太高的pH 值会使硅胶溶解，太低的pH 值会使键合的烷基脱落。 1 .2 .2 .2 滤膜的使用 对于盐类等试剂，或者没有色谱纯的试剂，可以使用分析纯的，但是在使用前需要用0.45um 或0.22um 的滤膜过滤。盐类试剂最好现配现用。 使...