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HPLC(液相色谱)常识及疑难详解(附实际操作图解)

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1 液相色谱基础知识 1 .1 液相色谱名词术语 Mobile phase:流动相,在色谱柱中存在着相对运动的两相,一相为固定相,一相为流动相。流动相是指在色谱过程中载带样品(组分)向前移动的那一相。 Stationary phase:固定相,柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。 Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中,按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子 k 达到良好的分离目的。 Detection wavelength:检测波长, retention time:保留时间,被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间 Peak:峰 Peak Base:峰基线,经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴 Peak Height:峰高,色谱峰顶点至峰底的距离。 Peak Width:峰宽,色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离 Peak Width at Half Height:半峰高宽 Peak Area:峰面积 Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰 Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰 Ghost Peak: 假峰,并非由试样所产生的峰 Baseline Drift:基线漂移 Baseline Noise:基线噪音 Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象. 1.2 流动相 1.2.1 流动相类型 正相液相色谱流动相:一般正相色谱固定相极性大于流动相极性,采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相);流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷),常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等),极性小的组分先出柱。 反相液相色谱流动相:一般用非极性固定相(如C18、C8);流动相为水或缓冲液,常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物,极性大的组分先出柱(现在大部分液相用的是反相色谱法)。 1.2.2 流动相注意事项 1.2.2.1 pH 值的选择 C18 和 C8 使用的流动相pH 值通常为 2.5~ 7.5(2~ 8),太高的pH 值会使硅胶溶解,太低的pH 值会使键合的烷基脱落。 1 .2 .2 .2 滤膜的使用 对于盐类等试剂,或者没有色谱纯的试剂,可以使用分析纯的,但是在使用前需要用0.45um 或0.22um 的滤膜过滤。盐类试剂最好现配现用。 使...

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