样品溶剂效应 很多因素可以导致峰形变差
样品溶液的组成与进样体积很可能就是导致此种现象的原因
问题 色谱图上较早洗脱的峰扭曲变形或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为尖锐与对称，这些现象显示一个比较特殊的起因――样品溶液的溶剂很可能强于流动相
此种强溶剂效应的例子在图 10－1A 中可见
此处的样品溶液的溶剂是 100％乙腈（100％的强溶剂），而流动相的组成则较弱，18％的乙腈与 72％的水
第一个峰是开叉的，并且与第二个峰相比，明显地变宽了
当样品溶液的溶剂变成流动相时，所有的峰形都改善了，且变得尖锐
见图 10－1B
解释 当样品进样时,有可能出现峰展宽,最佳的样品溶液组成和体积将会保持在 10%甚至更低,在这个例子里,当样品溶剂与流动相溶剂强度不同时,换句话来说,也就是样品未用流动相溶解,因此,有些样品分子溶解在强溶剂(100%ACE),并随强溶剂流过柱子,而有些则溶解在流动相中,从而导致峰分叉
当样品与流动相强度相差较小,进样影响也会小,第一个峰可能会宽于第二个峰,而当这种展宽导致必要的分离度降低时,这样情况应引起注意,在图10-2A中,使用一根短柱,和5UL 进样,这与最佳进样体积 4UL 相近,用了极性更强的溶剂导致分离度明显的降低,从 2
1 降到 1
5(如图 10-2B),分离度为 2 或更大是评估一个完善方法的一个必要参数,也是每天方法的验证参数,1
5 只是一个基本的分离度,任何一个方法或一根柱子都必需满足这个条件,当进样为一倍时,也就是 10UL 时,分离度更一步降低,此方法就不行了 溶剂峰 未用流动相溶解的样品 溶剂峰还是会有点的
流动相 也出峰的，基线就是稳定流速下的流动相通过检测池的吸收度，即流动相中各物质的混合吸收度
理论上来说，只要进入检测池中的物质浓度发生变化，吸收即会发生变化
因此当你进样时，由于单位时间通过检测池的流动相的量发
