HePG2 细 胞 和 L-02 细 胞 的 传 代 ： HePG2 细 胞 属 人 肝 肿 瘤 的 恒 生 细 胞 株 ， L-02 细 胞 则 是 人 胎 肝 细 胞 株 ， 二 者 所 使 用 的培 养 基 可 以 是 一 样 的 ， 即 最 常 见 的 DMEM。 一 干 使 用 低 糖 的 。 细 胞 长 满 培 养 瓶 时 既 要 传 代 。 使 用 胰 酶 消 化 即 可 。 用 D-Hank's 液 配 制 成 0.25%的 胰 酶 。 使 用 前 37 度 预 热 ， 细 胞 经 PBS清 洗 两 遍 后 ， 每 个 中 号 培 养 瓶 加 0.7ml 的 胰 酶 ， 胰 酶 的 量 可 根 据 自 己 培 养 瓶 的 大 小 而 定 ， 原 则 就 是 能 够 盖 满 瓶 底 。 加 入胰 酶 以 后 ， 为 使 酶 的 活 性 最 大 ， 将 培 养 瓶 盖 拧 紧 后 放 回 培 养 箱 中 ， 3 分 钟 左 右 即 用 含 血 清 的 培 养 基 终 止 消 化 。 如 果 在 室温 情 况 下 消 化 ， 时 间 相 应 加 长 ， 可 以 在 显 微 镜 下 观 察 ， 当 细 胞 界 限 已 十 分 清 楚 ， 即 已 分 离 为 单 个 细 胞 ， 且 有 少 量 细 胞 漂起， 则 要 终 止 消 化 了。 16HBE 细 胞 株 的 传 代 方法： 镜 下 观 察 细 胞 生 长 融合达70-80%， 准备传 代 。 常 规开紫外照射超净台20 分 钟 ， 同时 把含 10%胎 牛血 清 的 MEM 培 养 基 、0。 25%胰 酶 、PBS 放 置37 度 培 养 箱 中 孵育。 20 分 钟 后 开始传 代 。 先弃掉旧培 养 液 ， 加PBS 洗 一 次， 然 后 加 0。 25%胰 酶 2ml 消 化 （ 指 25 乘 25cm 大 小 的 培 养 瓶 ） 细 胞 ， 镜 下 观 察 细 胞 ， 细 胞 突 起回 缩 ， 细 胞 变 圆 ， 然 后 将 培 养 瓶 放 置37度 二 氧 化 碳 培 养 箱 中 孵育3 分 钟 左 右 （ 当 然 时 间 是 随 机 的 ， 比 如 ： 新 配 的 胰 酶 作 用 时 间 短 一 些 ， 配 制 时 间 长 的 胰 酶 作 用时 间 会 长 一 些 ， 当 然 要 不 断 地 镜 下 观 察 ）， 待 细 胞 大 部 分 消 化 下 来 （ 大 部 分 细 胞 ...
