免 疫 荧 光 技 术 （ 检 测 抗 核 抗 体（ ANA）的实验方案） 荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂，用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量测定。荧光免疫技术包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两大类。荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进行鉴定和定位检测，可在荧光显微镜下直接观察结果，称为荧光免疫显微技术，或是应用流式细胞仪进行自动分析检测，称为流式荧光免疫技术。荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。本次实验以荧光免疫显微技术检测抗核抗体(ANA)为例进行实习。 抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA 等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。 抗核抗体实验原理 以小鼠肝细胞或某些培养细胞(如Hep-2)作抗原片，将病人血清加到抗原片上。如果血清中含有 ANA，就会与细胞核成分特异性结合。加入荧光素标记的抗人IgG 抗体又可与 ANA 结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。 试剂与器材 1．抗原片 现多用商品试剂。如需 自行制 备 ，方 法 如下： (1)肝印 片制 备 ： 取 4-8 周 龄 小鼠，断 颈 杀 死 后 ，剖 腹 取肝。将肝脏 剪 成平 面 块 ，用生理盐 水洗 去 血细胞，用滤 纸 吸 干 渗 出 的浆 液。将切面 轻 压 于载 玻 片上，使 其在载 玻 片上留 下薄 层 肝细胞。冷 风 吹 干 ，乙 醇 固 定，冰 箱 可保 存 1 周 。 (2)Hep-2 细胞抗原片制备：Hep-2 细胞是建株的人喉癌上皮细胞。经适宜培养在载玻片上形成单层细胞抗原片，用洗涤洗去培养基。干燥后，用无水乙醇固定。 (3)肝切片制备：取小鼠肝组织作冰冻切片，厚4μl。-30℃保存备用。 2．异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人IgG 抗体(FITC-抗人IgG 抗体)有商品供应，临用时按效价稀释。 3．0.01mol/L pH7.2 PBS 4．缓冲甘油 取甘油 9 份加 PBS 1 份。 5.待测血清、阳性和阴性对照血清 临床标本筛选获得。 6．器材 荧光显微镜、孵箱、有盖湿盒、染色缸、吸管、试管等 操作方法 1．准备：检查加样板，生物载片恢复室温，标记。 2．稀释：PBS-Tween 缓冲液稀释血清，设阴阳性对照...
