精品文档---下载后可任意编辑APRIL 阻断剂 BCMA-Fc 的表达、纯化及活性讨论开题报告一、讨论背景随着免疫治疗技术的不断进展，作为具有重要作用的细胞因子，信号因子及受体的分子工程技术也得到了广泛应用。其中，B 细胞成熟抗原（BCMA）是 B 细胞病毒转录激活因子（B-cell maturation antigen，BCMA）和细胞因子类提取物 a proliferation-inducing ligand (APRIL)仅在 B 细胞生发能活化，而在其他类型的细胞上则表达不足或者完全不表达，因此，BCMA 和 APRIL 已被证明是一对非常理想的靶点以治疗多发性骨髓瘤（MM）等 B 细胞疾病。目前针对 BCMA 和 APRIL 制备的阻断剂包括单克隆抗体、Fc 融合蛋白、CAR-T 等，而 APRIL-Fc 融合蛋白能有效阻断 BCMA/APRIL 通路，并且在 Pre-B-ALL 细胞、浆细胞瘤细胞以及慢性淋巴细胞白血病细胞中证实了细胞毒性。因此，本讨论计划通过分子克隆和表达、蛋白纯化以及活性检测等方法，制备 April-Fc 融合蛋白，并对其进行活性讨论，为深化讨论 APRI-Fc 的应用提供基础性实验支持。二、讨论方法1. 分子克隆：根据 April-Fc 重组蛋白基因序列设计一对引物，进行PCR 扩增，将扩增产物进行酶切，将其连接到相应的载体上，以便于后续的表达。2. 细胞培育及表达：将所得到的重组载体转染到 CHO 细胞中，筛选表达 April-Fc 的克隆细胞，并进行小规模的表达和纯化。3. 蛋白纯化：将小规模表达的细胞培育液经离心取下细胞上清液，利用蛋白 A/G 纯化柱将目标蛋白进行纯化。4. 蛋白鉴定：将纯化的 April-Fc 融合蛋白进行 SDS-PAGE 电泳分析、Western Blot 检测、质谱鉴定以及内毒素检测等方法进行蛋白质鉴定。5. 活性检测：使用 WST-1 细胞增殖实验、流式细胞术等方法对April-Fc 融合蛋白的活性进行检测。三、估计结果精品文档---下载后可任意编辑通过上述方法制备出高质量的 April-Fc 融合蛋白，并对其进行了活性检测。根据检测结果，我们将对 April-Fc 融合蛋白的活性进行评价，并且探究其在临床前讨论中的潜在应用。四、讨论意义该讨论结果有助于深化探究 April-Fc 阻断 BCMA/APRIL 通路的分子机制，为该阻断剂的应用提供实验基础支持，对深化开发 BCMA 阻断剂等治疗方式及提高生存率有积极作用帮助。
