精品文档---下载后可任意编辑CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出现的一种由 RNA 指导Cas 核酸酶对靶向基因进行特定 DNA 修饰的技术。 CRISPR 是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防备机制。在这一系统中，crRNA（CRISPR-derived RNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activating RNA）结合形成双链 RNA，此 tracrRNA/crRNA 二元复合体指导 Cas9 蛋白在crRNA 引导序列靶定位点剪切双链 DNA 达到对基因组 DNA 进行修饰的目的。Cas9 结合 gRNA，gRNA 的长度约为 80 个核苷酸，包含两个区域：gRNA 5' 端前 20 个核苷酸对应于靶标 DNA，能结合在靶 DNA 上的约 60 个核苷酸（gRNA 长度取决于表达 gRNA 的质粒）形成一个发夹结构，这个结构能帮助 gRNA 与 Cas9 结合，并由此指导与 DNA 的结合。通过 gRNA 上的靶点序列，在目标基因组上找到靶点序列，并揭开双螺旋，Cas9 将剪切 DNA 双链，造成 DNA 双链断裂。Cas9 使用简单，可满足多个靶点同时操作。基因敲除小鼠流程：
