精品文档---下载后可任意编辑MDCKII--hMDR1hBCRP 共表达细胞株平台的建立及生物学功能讨论中期报告报告摘要：本讨论旨在建立一个表达两种重要 ABC 转运蛋白 hMDR1 和hBCRP 的 MDCKII 细胞株平台，并讨论这两种转运蛋白在该细胞株中的生物学功能。讨论过程中，我们先利用 PCR 方法克隆了 hMDR1 和 hBCRP 的cDNA 序列，然后将这两种序列分别插入到 pCR3.1 表达载体中，得到了 pCR3.1-hMDR1 和 pCR3.1-hBCRP 两个构建。接着，我们将这两个构建转化到 MDCKII 细胞中，利用荧光显微镜观察转染效果，并利用Western blotting 验证蛋白表达情况。结果表明，我们成功地将 hMDR1 和 hBCRP 都成功地表达到MDCKII 细胞中。通过细胞孔隙菌素 C（CPS）抗生素筛选，最终单克隆稳定细胞株 MDCKII-hMDR1 和 MDCKII-hBCRP 也被成功建立。Western blotting 结果证实了这两种细胞中都能高表达对应的转运蛋白。接下来，我们对这两种细胞进行了药物转运实验，结果表明，MDCKII-hMDR1 细胞能有效转运激素类药物 doxorubicin 和vinblastine，而 MDCKII-hBCRP 细胞则能有效转运乙二膦酸类化合物米托蒽醌（mitoxantrone）和比但卓（bendamustine）。综上所述，本讨论已经成功建立了 hMDR1 和 hBCRP 共表达的MDCKII 细胞株平台，并证实了这两种转运蛋白在该细胞株中的生物学功能。这一讨论为该细胞株平台在药物筛选和药物转运讨论中的应用提供了可靠的实验基础。
