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实验六、反相高效液相色谱法测定尼泊金甲酯

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1 实验六、反相高效液相色谱法测定尼泊金甲酯 一、实验目的 1 、了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作。 2 、了解反相色谱法的基本原理,掌握反相色谱法分离尼泊金甲酯的方法。 3 、掌握利用内标法进行色谱定量分析的实验方法。 二、实验原理 1 、对羟基苯甲酸甲酯,又叫尼泊金甲酯,结构式:白色结晶粉末或无色结晶,易溶于醇,醚和丙酮,极微溶于水,沸点2 7 0 -2 8 0 ℃。 主要用作有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂,也用作于饲料防腐剂。 由于它具有酚羟基结构,所以抗细菌性能比苯甲酸、山梨酸都强。其作用机制是:破坏微生物的细胞膜,使细胞内的蛋白质变性,并可抑制微生物细胞的呼吸酶系与电子传递酶系的活性。 2 、高效液相色谱 高效液相色谱是2 0 世纪 7 0 年代初发展起来的一种新型分离分析技术。他是在经典液相色谱的基础上,引入气相色谱理论,在技术上采用高压输压泵、梯度洗脱技术、新型高效填充剂及各种高灵敏度监测器。 高效液相色谱与气相色谱比较,可供选择的流动相种类较多,从有机溶剂到水溶剂,既能用纯溶剂又可用二元或多元混合溶剂,并可任意调配比例,通过改变溶剂极性或强度继而改变色谱柱效能、分离选择性和组分的容量因子,最后实现改善色谱系统分离度的目的。 3 、高效液相色谱法的特点: 1 )分析速度快。 2 )离效率高。 3 )灵敏度高、易于实现操作自动化。 4 )适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 2 4 、高效液相色谱仪流程示意图: 5 、进样装置 流路中为高压力工作状态,通常使用耐高压的六通阀进样装置,其结构如图所示: 6 、定性方法: 1 )利用纯物质定性的方法 ① 利用保留值定性:通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰, 3 来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。 ② 利用加入法定性:将纯物质加入到试样中,观察各组分色谱峰的相对变化。 (2)利用文献保留值定性 7、常用的几种定量方法 (1)归一化法:若试样中含有n个组分,且各组分均能洗出色谱峰,则其中某个组分的质量可按下式计算 归一法特点及要求: ① 归一化法简便、准确; ② 进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大; ③ 仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。 (2)内标法:在一定试样中加入一定量的内标物,根据待测组分和内标物的峰面积及物质量计算待测物质...

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