1 实验六、反相高效液相色谱法测定尼泊金甲酯 一、实验目的 1 、了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作
2 、了解反相色谱法的基本原理，掌握反相色谱法分离尼泊金甲酯的方法
3 、掌握利用内标法进行色谱定量分析的实验方法
二、实验原理 1 、对羟基苯甲酸甲酯，又叫尼泊金甲酯，结构式：白色结晶粉末或无色结晶，易溶于醇，醚和丙酮，极微溶于水，沸点2 7 0 -2 8 0 ℃
主要用作有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂
由于它具有酚羟基结构，所以抗细菌性能比苯甲酸、山梨酸都强
其作用机制是：破坏微生物的细胞膜，使细胞内的蛋白质变性，并可抑制微生物细胞的呼吸酶系与电子传递酶系的活性
2 、高效液相色谱 高效液相色谱是2 0 世纪 7 0 年代初发展起来的一种新型分离分析技术
他是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱理论，在技术上采用高压输压泵、梯度洗脱技术、新型高效填充剂及各种高灵敏度监测器
高效液相色谱与气相色谱比较，可供选择的流动相种类较多，从有机溶剂到水溶剂，既能用纯溶剂又可用二元或多元混合溶剂，并可任意调配比例，通过改变溶剂极性或强度继而改变色谱柱效能、分离选择性和组分的容量因子，最后实现改善色谱系统分离度的目的
3 、高效液相色谱法的特点： 1 ）分析速度快
2 ）离效率高
3 ）灵敏度高、易于实现操作自动化
4 ）适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法
2 4 、高效液相色谱仪流程示意图： 5 、进样装置 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示： 6 、定性方法： 1 ）利用纯物质定性的方法 ① 利用保留值定性：通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰， 3 来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置
不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比
② 利用加入法定性：将纯物
