氨基酸的纸层析法 一.目的 了解并掌握氨基酸纸层析的原理和方法
二、原理 以滤纸为支持物的层析法,称为纸层析法
纸层析所用展层剂大多由水和有机溶剂组成
展层时,水为静止相,他与滤纸纤维亲和力强;有机溶剂为流动相,它与滤纸纤维亲和力弱
有机溶剂在滤纸上又下向上移动的,称为上行法;有上向下移动的,称为下行法
将样品在滤纸上确定的原点处展层,由于样品中各种氨基酸在两相中不断进行分配,且他们的分离系数各不相同,所以不同的氨基酸随流动相移动的速率也不相同,于是各种氨基酸在滤纸上就相互分离出来,形成距原点不等的层析点
在一定条件下(室温、展层剂的组成、滤纸的质量、PH 值等不变),不同的氨基酸有固定的移动速率(Rf 值)Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离
用混合氨基酸做样品时,如果只用一种溶剂展层,由于某些氨基酸的移动速率相同或相近,就不能将它们分开,为此,当用一种溶剂展层后,可将滤纸旋转 90 度,以第一次所的层析点为原点,在用另一溶剂展层,从而达到分离的目的
这种方法称为双向层析法
本试验主要介绍的是单向层析法
其中混合氨基酸有精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸组成
三、实验仪器 1、 新华滤纸 2、 层析缸 3、 细线 4、 点样管 5、 橡皮筋 6、 电吹风 7、 喷雾器 四、实验试剂 1、 混合氨基酸(精氨酸,酪氨酸,苯丙氨酸) 2、展层剂:正丁醇:12%氨水:95%乙醇:蒸馏水=13:3:3:1(v:v) 3、0
5%茚三酮—无水丙酮溶液:0
5g 茚三酮溶于100ml 无水丙酮,贮于棕色瓶中 五、实验步骤 1、取滤纸剪成20×10 厘米的滤纸条一张,在一端打孔,系一根细线,在另一端 2~3cm 处用铅笔画一横线,中间画一圆点(原点)
2、取毛细管一支(回收),吸取氨基酸混合液,在原点处点样,样点直径不宜超过 5mm,每点一次用吹风机吹干,点2~3 次为佳