实 验 名 称 碱 性 磷 酸 酶 的 分 离 纯 化 、 比 活 性 测 定 与 动 力 学 分 析 实 验 日 期 2011 年 10 月 25 号 实 验 地 点 生 化 实 验 室 合 作 者 指 导 老 师 总 分 教 师 签 名 批 改 日 期 碱 性 磷 酸 酶 （ AKP 或ALP） 是 一 种 底 物 特 异 性 较 低 ， 在 碱 性 条 件 下 能 水 解 多 重 磷 酸 单脂 化 合 物 的 酶 ， 需 要 镁 和 锰 离 子 为 激 活 剂 。 AKP 具 有 磷 酸 基 团 转 移 活 性 ， 能 将 底 物 中 的 磷酸 基 团 转 移 到 另 一 个 含 有 羟 基 的 接 受 体 上 ， 如 磷 酸 基 团 的 接 受 体 是 水 ， 则 其 作 用 就 是 水 解 。AKP 最 适 Ｐ Ｈ 范 围 为 ８ .６ － １ ０ ， 动 物 中 AKP 主 要 存 在 于 小 肠 粘 膜 、 肾 、 骨 骼 、 肝 脏 和 胎盘 等 组 织的 细胞膜 上 。 血清AKP 主 要 来自肝 ， 小 部分 来自骨 骼 。 AKP 可从组 织中 分 离 纯 化 ， 也可以采用 基 因工程表达的 方式获得：将 碱 性 磷 酸 酶 基 因克隆到 重 组 载体 ， 转 入宿主 菌中 进行重 组 表达， 并从表达菌提取， 并进行酶 动 力 学 分 析 。 一 实 验 原理 1 、 碱 性 磷 酸 酶 的 分 离 纯 化 AKP 分 离 纯 化 的 方法与 一 般蛋白质的 分 离 纯 化 方法相似，常用 中 性 盐盐析 法、电泳法、色谱法、 有 机溶剂 沉淀法等 方法分 离 纯 化 。 有 时需 要 多 种 方法配合 使用 ， 才能 得到 高纯 度的酶 蛋白。 本实 验 采用 有 机溶剂 沉淀法从兔肝 匀浆液中 提取分 离AKP。 正丁醇能 使部分 杂蛋白变性 ， 过滤除去杂蛋白即为 含 有 AKP 的 滤液， AKP 能 溶于 终浓度为 33%的 丙酮或 30%的乙醇中 ，而不溶于 终浓度为 50%的 丙酮或 60%的 乙醇中 ，通过离 心即可得到 初步纯 化 的 AKP。 2 、 碱 性 磷 酸 酶 的 比 活 性 测 定 根据国际酶 学 委员会规定 ， 酶 的 比 活 性 用 每毫克蛋白质具 有 的 酶 活 性 来表示， 单 位（ U/mg•pr） 来表示。 因此， 测 定 样品的 比 活 性 必须测 定 ：...
