1 一.实验内容 实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂: 10%三氯乙酸(TCA)(纯) 0.25%硫代巴妥酸 (纯) 实验2:可溶性蛋白含量测定所需试剂: 考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸 实验3:SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂: dl-甲硫氨酸(Met) NBT EDTA-Na2 核黄素 实验4:CAT(过氧化氢酶)活性(过氧化氢酶)测定所需试剂: PBS(PH=7.0) 30% H2O2 实验五:Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性(即ASA—POD活性)测定所需试剂: ASA(分子量167.12) (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O 实验6: ASA(维生素C)含量测定 偏磷酸 95%乙醇 磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3(或FeCl3·6H2O) 实验7:GSH(谷胱甘肽, 媚力肽 GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂: NaH2PO4·2H2O DTNB(二硫代硝基苯甲酸) PBS (PH6.8) 实验8:脯氨酸测定所需试剂: 磺基水杨酸 甲苯 茚三酮 冰乙酸 85%磷酸 试验9:叶绿素含量测定。 80%丙酮 试验9:GR活性测定 试验10:过氧化氢含量测定。 三氯乙酸 试验11:超氧阴离子含量测定 二.酶液和母液提取 1. 酶液提取所需试剂:50mmol/L磷酸缓冲液(PH=7.8)(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮 PVP),0.1mmol/LEDTANa2或EDTA),也可为(内含2% (m/v)PVP),0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA)(先配制后用缓冲液定容) 2. ASA . GSH母液提取所需试剂:5%偏磷酸 1.抗氧化酶酶液提取(SOD.POD.CAT): 1g(根据样品的量,少的可以适当减少)叶片加入预冷 5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液(PH=7.8) ↓ 4℃冷冻 15000g离心 20分钟 ↓ 上清液即为酶液(5℃下保存一两天内备用,中短期用-20℃保存) 2.ASA . GSH母液提取: 0.1g叶片加入 3ml预冷 5%偏磷酸溶液 ↓ 4℃冷冻 14000g离心 10分钟 ↓ 上清液即为母液(5℃下保存备用) (偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护 ASA) 酶液提取所需试剂: PVP(聚乙烯吡哆烷酮):1%(1g溶于 100ml水),1000ml需称取 10g,此处用 PBS EDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于 1000ml蒸馏水),此处用 PBS 2 PBS(缓冲液)配制方法:① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O 取① 71.64g,蒸馏水定容至 1L,取② 31.21g定容至 1L,放置 4℃冰箱备用 PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度 0.2mol/L) 需要 0.05mol/L→将上述溶液烯释至 400m...