植物生理学中各项生理指标的测定方法

1 一.实验内容 实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂： 10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯) 实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂： 考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸 实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂： dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素 实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂： PBS（PH=7.0） 30% H2O2 实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂： ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O 实验6： ASA(维生素C)含量测定 偏磷酸 95%乙醇 磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O） 实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽 GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂： NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8) 实验8：脯氨酸测定所需试剂： 磺基水杨酸 甲苯 茚三酮 冰乙酸 85%磷酸 试验9：叶绿素含量测定。 80%丙酮 试验9：GR活性测定 试验10：过氧化氢含量测定。 三氯乙酸 试验11：超氧阴离子含量测定 二．酶液和母液提取 1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮 PVP），0.1mmol/LEDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容） 2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸 1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）： 1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷 5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8） ↓ 4℃冷冻 15000g离心 20分钟 ↓ 上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存） 2．ASA . GSH母液提取： 0.1g叶片加入 3ml预冷 5%偏磷酸溶液 ↓ 4℃冷冻 14000g离心 10分钟 ↓ 上清液即为母液（5℃下保存备用） （偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护 ASA） 酶液提取所需试剂： PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于 100ml水），1000ml需称取 10g，此处用 PBS EDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于 1000ml蒸馏水)，此处用 PBS 2 PBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O 取① 71.64g，蒸馏水定容至 1L，取② 31.21g定容至 1L，放置 4℃冰箱备用 PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度 0.2mol/L) 需要 0.05mol/L→将上述溶液烯释至 400m...