【目的】：掌握 BCA 法测定蛋白质浓度的原理。【原理】：BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，蛋白质将 Cu2+还原为 Cu+，一个 Cu+螯合二个 BCA 分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。【操作】标准曲线的绘制：取试管七支、编号，按下表操作：【计算】 （一） 绘制标准曲线。 （二） 以测定管吸光度值，查找标准曲线，求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。 （三） 再从标准管中选择一管与测定管光密度相接近者，求出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。【优缺点】(一) 操作简单，快速，45 分钟内完成测定，比经典的 Lowary 法快 4 倍且更加方便；(二) 准确灵敏，试剂稳定性好，BCA 试剂的蛋白质测定范围是 20-200μg/ml，微量 BCA 测定范围在 0.5-10μg/ml。(三) 经济实用，除试管外，测定可在微板孔中就进行，大大节约样品和试剂用量；(四) 抗试剂干扰能力比较强，如去垢剂，尿素等均无影响【器材】 （一） 7220 型分光光度计 （二） 恒温水浴箱 （三） 中试管 7 支 （四） 枪式移液管【试剂】1 、 试剂 A：1％BCA 二钠盐2 ％无水碳酸钠0.16% 酒石酸钠0.4 ％氢氧化钠0.95 ％碳酸氢钠混合调 PH 值至 11.25 。2 、 试剂 B：4 ％硫酸铜。3 、 BCA 工作液：试剂 A 100ml ＋ 试剂 B 2ml 混合。4 、 蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml 的蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定）5 、 待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成。此法测定蛋白质浓度，近些年被科研工作者广泛选用。目前 BCA 法的试剂盒市 面有售。总之，虽然蛋白质含量的测定方法很多，但是，还没有一个完美的方法。在选择测定方法时，可根据实验要求和实验室条件决定。内容总结（1）【目的】：掌握 BCA 法测定蛋白质浓度的原理（2）(三) 经济实用，除试管外，测定可在微板孔中就进行，大大节约样品和试剂用量 （3 ）（纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定）5 、 待测样品：用双缩脲测定法的样品稀释而成（4）总之，虽然蛋白质含量的测定方法很多，但是，还没有一个完美的方法
