高中生物： 61 蛋白质的提取和分离（素材）新人教版中图版选修1VIP专享

6.1 蛋白质的提取和分离问题：斐林试剂和双缩脲试剂成份相同，为什么斐林试剂不能用来检测蛋白质？（1）溶液浓度不同 斐林试剂中乙液为 0.05g/ml 的 CuSO4 溶液，双缩脲试剂中 CuSO4 溶液为 0.01g/ml（2）使用原理不同 斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。 （3）使用方法不同 斐林试剂使用时，先反溶液和溶液混合（将滴溶液滴入溶液中），而后立即使用,需要加热。[来源:学科网][来源:学+科+网]双缩脲试剂使用时，先加入溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入 3~4 滴溶液，振荡摇匀后观察现象。（4）颜色反应不同斐林试剂与还原糖混合是产生砖红色沉淀，双缩脲试剂与蛋白质反应产生紫色反应。 [来源:Zxxk.Com][来源:学科网 ZXXK]一、植物组织蛋白质提取方法 [来源:学科网 ZXXK] 1、根据样品重量（1g 样品加入 3.5ml 提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。 3、用离心机离心 8000rpm40min4℃或 11100rpm20min4℃ 4、提取上清液，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对 SDS-PAGE，垂直板电泳！[来源:Zxxk.Com] 二、植物组织蛋白质提取方法 氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积 3 倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm 以上 1 小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含 0.07%的 β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm 以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。[来源:学科网 ZXXK] 4、上样前加入裂解液，室温放置 30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上 1 小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在 4℃待用。 5、用 Brandford 法定量蛋...