电泳图片光密度分析原理与方法 无论是 DNA 电泳图片还是 RNA 电泳图片，或者是蛋白的凝胶电泳图片包括 Western blot 膜、或者是化学发光膜图片，在图像分析的角度来看，都是同样的一种条带光密度分析的问题。 分析电泳条带有专门的一类图像分析软件。常见的是 Bandscan, Quantity One, 由各个凝胶电泳成像系统厂商自己编制的软件就更多了。我喜欢用的是 Labworks, 是 UVP 公司生产的凝胶电泳成像系统上配用的拍摄与分析软件，实际上就是传说中大名鼎鼎的 gel-pro。这个软件可以看作是 Image-pro plus 应用在电泳条带分析上的专业版。所以用惯了 IPP 后对 gel-pro 就会感觉很熟悉。很快就能学会使用。现在 UVP 已经不使用 labworks 了，另弄了一个visionworks软件，用起来就是没 gel-pro 舒服。实际上所有的电泳条带分析软件在分析原理与功能上都没什么差别。只是软件界面与操作程序上各有不同。所以，了解了条带的分析原理后也就能自己学会各种软件的使用了。 分析电泳条带也是从拍摄电泳照片开始的。用平时玩的数码相机拍摄的电泳条带一般不能用来进行定量的分析。而必须使用专门的拍摄设备。大家一般称它为“凝胶成像系统”。它集中了观察，拍摄与分析凝胶的所有功能。 一个凝胶成像系统包括了三个部分，暗箱，相机与电脑上的控制分析程序。让我们从使用成像系统的操作方法中来了解如何正确地拍摄与分析凝胶吧。 一、暗箱 一个最简单的暗箱就是个不透光的箱子里面放了一个紫外灯箱，高级一点的暗箱则有好几组灯光照明。当然，在箱子上面会有一个安放相机的地方。 紫外灯箱是观察与拍摄凝胶的必需照明设备。它是用来观察 EB 染色的凝胶条带的。里面的紫外灯光能提供256nm,302nm 及 365nm 的紫外光。在观察 EB 的红色荧光条带时，一般用 302nm。 在观察与拍摄蛋白凝胶的时候，必须使用透射白光照明。有的暗箱里会有白板照明灯，平时向上掀起靠在后壁上，使用时拉下来。简单的暗箱则是用一块荧光板放在紫外灯箱上面，用紫外光照射荧光板，发出白色光。用白板的透射光照明来拍摄蛋白凝胶的道理有点像医院里用灯箱来观察 X 光片。只有在透射光下，才能正确地反映凝胶上条带的光密度分布。 透射光下拍摄的蛋白凝胶图片条带层次很丰富的。普通照明下是没这个效果的。 暗箱上面也有白光照明与紫外光照明。这是用来拍摄普通样品的灯光。比如拍摄Western blot膜。 实际上一个照明配置完整的暗箱绝不仅...
