高效液相色谱仪操作步骤及注意事项汇总1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气 10-20 分钟。3.打开 HPLC 工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4 进入 HPLC 控制界面主菜单，点击 manual，进入手动菜单。5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在 manual 菜单下，先点击 purge，再点击 start，冲洗时速度不要超过 10?ml/min。6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过 2000。点击 injure，选用合适的流速，点击 on,走基线，观察基线的情况。7. 设计走样方法。点击 file,选取 select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击 new?method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击 protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般 2-5 分钟；b.基线归零；c.进样阀的 loading-inject 转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。&进样和进样后操作。选定走样方法，点击 start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击 postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9．填写登记本，由负责人签字。10．流动相均需色谱纯度，水用 20m 的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。11．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。12．所有过柱子的液体均需严格的过滤。13．压力不能太大，最好不要超过 2000psi。选择波长要从以下几个方面考虑：1. 检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。2. 对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。3.外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。一、液相色谱流动相的性质要求:一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等...
