琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程

琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程凝胶电泳操作注意事项：1。 缓冲系统:在没有离子存在时,电导率最小,DNA 不迁移，或迁移极慢,在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热,可能导致 DNA 变性,因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的.2。 琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同,影响 DNA 的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用.3。 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致,溶解的凝胶应及时倒入板中,避开倒入前凝固结块.倒入板中的凝胶应避开出现气泡，影响电泳结果。4。 样品加入量：一般情况下，0。5cm 宽的梳子可加 0.5ug 的 DNA 量，加样量的多少依据加样孔的大小及 DNA 中片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的 DNA 此现象更明显。5。 电泳系统的变化会影响 DNA 的迁移,加入 DNA 标准参照物进行判定是必要的。6。 DNA 样品中盐浓度会影响 DNA 的迁移率,平行对比样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。7。 DNA 迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度,迁移分子的形状及大小.采纳不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的 DNA 分子，制备琼脂糖凝胶可根据 DNA 分子的范围来决定凝胶的浓度.小片段的 DNA 电泳应采纳聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。琼脂糖加样时候注意事项：1、 用移液抢将样品加至点样孔。每孔点样的体积一般少于 25ul，因此吸取每一个样品时，操作要稳当且细心.2、 常加一定量的蔗糖来增加样品的浓度，以使每个样品停留在各自的点样孔中。3、 在样品中加入水溶性的阴离子追踪染料（如溴酚蓝)，用以看出样品移动的距离。4、 在一个或几个孔中加入标准分子质量样品，电泳结束后,根据已知分子质量的带的相应位置可用来做出标准曲线。5、 电泳一般是在追踪染料泳动到胶的 80%部位时停止。注意电泳期间，电泳槽盖要安全盖好,以防止液体蒸发，又可以降低电击的可能性。6、 电泳结束后,将胶浸没在 1mg/L 的溴化乙锭（EB）中，5min 后即可看到 DNA 带,EB 通过插入在双螺旋的配对核苷酸之间同 NDA 结合。另一种方法是电泳时,在胶中加入 EB。7、 在紫外灯下，由于 EB 发出强烈的橘红色的荧光，所以可以看到 DNA 带。利用这种方法检测的界限是每条带约 10ng DNA.带上塑料安全眼镜可防止紫外光对眼睛的损害。可用尺子来测量每条带至点样孔的距离。同样，利...