生物多肽工艺流程一、固相肽合成 (1)投料:树脂加入固相合成仪,加入 DCM 溶胀,抽干后加入 DMF 洗涤,洗涤结束抽干备用
(2)缩合:将氨基酸用一定体积的 DMF 溶解,加入缩合剂活化后投入固相合成仪,补充 DMF 至反应浓度,搅拌反应
(3)脱除保护基:以 Kaiser 试剂检测反应程度,反应结束后抽干溶剂,DMF 洗涤,加入 PIP/DMF 溶液脱除保护基,以 Kaiser 试剂检测反应程度,反应完毕抽干溶剂,DMF 洗涤,准备加入下一个氨基酸
(4)缩合循环:根据树脂序列依次连接氨基酸,根据“脱保护——洗涤-—活化氨基酸——投料缩合——洗涤”步骤进行缩合循环操作,根据氨基酸序列完成剩余 n 个氨基酸的缩合
(5)出料:合成结束之后用 IPA 和 DCM 交叉洗涤树脂,完成树脂收缩收缩,出料至不锈钢托盘
(6)树脂干燥:树脂在真空干燥箱中室温干燥,干燥完毕称重,计算收率
(7)有机废液回收,集中处理
(8)清场:操作结束后操作人员及时清场
二、树脂裂解 (1)配液:根据裂解液成分比例配置裂解液,并提前置冰柜中冷藏保存
(2)投料:肽树脂加入反应釜中,加入预冷的裂解液,搅拌反应
(3)出料:裂解结束后放出反应液,抽滤除去树脂并以 TFA 洗涤
(4)浓缩:裂解液转入旋转蒸发仪室温浓缩至小体积
(5)析出:浓缩后的反应液倾入预冷的甲基叔丁基醚(简称醚)中,搅拌使析出大量固体
(6)离心:浊液离心,并用预冷的醚洗涤
(7)粗肽干燥:涤完成的粗肽转至真空干燥箱中室温干燥
(8)有机废液回收,集中处理
(9)清场:操作结束后操作人员及时清场
三、多肽 HPLC 纯化 (1)溶解:操作人员将粗肽溶解,调节 PH 至工艺规定范围
(2)过滤:滤去粗肽溶液中不溶物,过滤 ACN 和纯化水
(3)配制纯化液:根据工艺内容配制 A 相(乙腈)和