几种PCR扩增的比较

普通 PCR、原位 PCR、反向 PCR 和反转录 PCR 的基本原理和操作步骤普通 PCR1 概述聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称 PCR，是一种分子生物学技术，用于放大特定的 DNA 片段。可看作生物体外的特别 DNA 复制。DNA 聚合酶（DNA polymerase I）最早于 1955 年发现，而较具有实验价值与有用性的Klenow fragment of E. Coli 则是于 70 年代的初期由 Dr. H. Klenow 所发现，但由于此酶不耐高温，高温能使之变性, 因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称 Taq polymerase), 则是于 1976 年从温泉中的细菌（Thermus aquaticus）分离出来的。它的特性就在于能耐高温，是一个很理想的酶，但它被广泛运用则于 80 年代之后。PCR 最初的原始雏形概念是类似基因修复复制，它是于 1971 年由 Dr. Kjell Kleppe 提出。他发表了第一个单纯且短暂性基因复制（类似 PCR 前两个周期反应）的实验。而现今所进展出来的PCR 则于 1983 由 Dr. Kary B. Mullis 进展出的，Dr. Mullis 当年服务于 PE 公司，因此 PE 公司在 PCR 界有着特别的地位。Dr. Mullis 并于 1985 年与 Saiki 等人正式发表了第一篇相关的论文。此后，PCR 的运用一日千里，相关的论文发表质量可以说是令众多其它讨论方法难望其项背。随后 PCR 技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用，成为分子生物学讨论的最重要技术。Mullis 也因此获得了 1993 年诺贝尔化学奖。 2 PCR 原理PCR 技术的基本原理类似于 DNA 的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板 DNA 的变性：模板 DNA 经加热至 93℃左右一定时间后，使模板 DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链 DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板 DNA 与引物的退火(复性)：模板 DNA 经加热变性成单链后，温度降至 55℃左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在 TaqDNA 聚合酶的作用下，以 dNTP（脱氧核糖核苷三磷酸）为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板 DNA 链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2～4 分...