《基因工程》第二章工具酶

第二章 : 基因工程工具酶主讲教师 : 杨应斌答疑 QQ 号 : 715656164基因工程一、 DNA 限制性内切酶二、甲基化酶 三、分子克隆过程中所需要的另一些酶Lurva 和 Human （ 1952 ）以及 Bertani 和Weigle （ 1953 ）发现了噬菌体 λ 的限制作用各种细菌都能合成一种或几种顺序专一的核酸内切酶。这些酶切割 DNA 的双链，因为它们的功能就是切割 DNA ，限制外源性DNA 存在于自身细胞内，所以称这种核酸内切酶为限制酶。合成限制酶的细胞自身的 DNA 可以不受这种酶的作用，因为细胞还合成了一种修饰酶，它改变了限制酶识别的 DNA 顺序的结构，使限制酶不能起作用。目前，从各种生物中分离出的限制性内切酶已接近 200 种，其中 80 多种是切割 DNA 双链。（一）命名原则限制性内切酶主要是从原核生物中提取的。现在通用的命名原则是：属名种名株名如果同一菌株中有几种不同的内切酶时，则分别用罗马数字Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……来代表。Haemophilusinflueuzaed酶名Hind IIIEscherichiacoliRY13EcoRⅠ（二）分类和特性第二类限制性内切酶的识别顺序是一个回文顺序 , 如 EcoRI 的识别顺序为：5’……G*A-A-T-T- C……3’3’……C- T- T-A-A*G……5’讨论 : 下面的序列中可能含有多少个潜在的酶切位点 ?GAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGA132654一、 DNA 限制性内切酶二、甲基化酶 三、分子克隆过程中所需要的另一些酶二、甲基化酶限制 - 修饰系统中的修饰作用是由甲基化酶（ methylase ）来完成的。甲基化酶同限制性内切酶具有完全相同的识别顺序。甲基化酶使识别顺序中的某个碱基发生甲基化，保护 DNA 不被限制性内切酶切开。DNA 甲基化酶普遍存在于原核和真核生物中，能将 S- 腺苷甲硫氨酸上的甲基转移到腺嘌呤或者是胞嘧啶上。在原核生物中， DNA 甲基化酶作为限制修饰系统的一个组成部分广泛存在，它们的作用是保护宿主菌不被相应的限制性内切酶切割。大多数实验室使用的大肠杆菌包括三种位点特异性的 DNA 甲基化酶。 由 dam 基因（ Dam 甲基化酶）编码的甲基化酶能将甲基转移到 GATC 序列中的腺嘌呤 N6 位点上。由 dcm 基因编码的 Dcm 甲基化酶，能在 CCAGG 和 CCTGG 序列内部的胞嘧啶 C5 位置上甲基化。EcoKI 甲基化酶，可将 AAC （ N6A ） GTGC 和 GCAC （ N6A ） GTT 上的腺嘌呤进行甲基化修饰。(1) 原核生物ＤＮＡ甲基化如果限制性内切酶的识别位点是从表...