血凝抑制实验报告 【篇一】血凝抑制实验报告 禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的 监测，也可用于推断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验 是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监 测所普遍釆用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操 作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感 抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病 监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为 操作影响较大，常常因操作不法律规范、不严谨等造成结果偏差 大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过 程中应注意的事项做一探讨。 一、血凝试验操作程序 1、 取 96 孔 9° V 形酶标板，用微量移液器在第一至第 五排的 ri2 孔每孔加 25 卩LPBS 液。 2、 吸取 25 卩 L 标准禽流感抗原加入到第一排第 1 孔中 充分混匀。 3、 从第 1 孔吸取 25 nL 混匀后的抗原液加到第 2 孔中, 混匀后吸取 25 卩 L 加入到第 3孔中，依次进行倍比稀释至第 二排最后一孔即第 24 孔，最后弃去 25 卩 L。第三排孔至第四 排孔同上操作。 4、 依次向第一至第五排孔的每孔中加入 25 卩 L1%的鸡 红细胞悬液。 5、 将酶标板置于微量振荡器上振荡 1 秒，室温 （2-25°C）静置 3min 观察结果（假如环境温度太高，可 置 4°C 环境下）。 6、结果判定将板作 45°倾斜，观察红细胞是否呈泪 滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒稀释倍数为 1 个血凝单位（HAU） 二、血凝抑制试验操作程序 1、 根据血凝试验结果配制 4HAU 抗原。（即 1HAU 抗原除 以 4） 2、 取 96 孔 V 形酶标板，用移液器在第 ri2 孔各加入 25 卩 LPBSo 3、 在第 1 孔加入 25 UL 被检血清，充分混匀后移出 25 卩 L 加至第 2 孔，依次类推，倍比稀释至第 12 孔，弃去 25 卩 Lo 4、 按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份）， 作对比孔。 5、 在第 P12 孔各加入 25UL4 单位抗原，置于微量振 荡器上轻轻混匀，室温 2-25°C下静置 3mino 6、 每孔加入 25 卩 L1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡 器上轻轻混匀，室温（ 2-25°C）静置 4min 后观察结果， 若环境温度过高，可于 4°C 条件下进行，红细胞将呈明显的 纽扣状沉到孔底。 7、 结果判定只有阴性对比孔血清滴度不大于 21og2, 阳性对比孔误差不超过...
