江苏省盐城中学高中生物 第一节 DNA 重组技术的基本工具复习资料 苏教版必修 3基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外 DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 DNA 分子水平 上进行设计和施工的，又叫做 DNA 重组技术。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）种类：已从近 300 种中不同的微生物中分离出了约 4000 种 。例如 EcoRI,SmaI等。（3）功能：能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序 列（一般为 6 个核苷酸对组成的序列，少数是 4 个或 5 个，序列均为回文序列），并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。（4）结果：经限制酶切割产生的 DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”——DNA 连接酶 (1)两种 DNA 连接酶（E·coliDNA 连接酶和 T 4DNA 连接酶 ）的比较：① 相同点：都缝合磷酸二酯键。② 区别：E·coliDNA 连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链 DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而 T4DNA 连接酶来源于 T4 噬菌体，能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2)与 DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA 连接酶是连接两个 DNA 片段的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点 ， 供外源 DNA 片段插入。③具有标记基 因，供重组 DNA 的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状 DNA 分子 。（在基因操作中，真正被用做载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行了人工改造）（3）其它载体： λ 噬菌体的衍生物、动植物病毒
