BD流式全面介绍专题培训课件

流式细胞术 流式细胞术（ Flow Cytometry, 简称 FCM ）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、染色体、微生物、及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 流式细胞仪系统简介—通过流式细胞仪我们可以得到以下信息 -相对细胞大小 - 相对细胞颗粒密度和内部复杂度 - 染色过细胞的相对荧光强度 Injector TipFluorescenceFluorescencesignalssignalsFocused laserFocused laserbeambeamSheath fluid 流式细胞仪的光信号—散射光信号—荧光信号 1. 散射光信号•前向角散射光（ FSC,Forward Scatter ） 入射激光的同向散射光信号 细胞相 对大小及其表面积。 •侧向角散射（ SSC, Side Scatter ） 入射激光 90 角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性。 前向角散射光 —— FSC—Forward Angle Light ScatterForward Angle Light ScatterFALS SensorLaser 侧向角散射光—— SSCFALS Sensor90LS SensorLaser 散射光—散射光能被用来区分不同细胞群体的基本形态上的差异 -通常使用“散点图”来看散射光信号 -散点图上的一个点就代表一个细胞颗粒的数据 散点图—— Dot Plotlysed whole blood Review QuestionDead cells are known to be smaller and to exhibit more internal complexity than live cells. Which of the populations on this plot would you expect to be dead? 2. 荧光信号2. 荧光信号 荧光素吸收激光能量 荧光素将吸收能量释放，转换为振动能和热能释放较入射光波长更长的光量子 荧光素与特异抗体结合 荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强 荧光检测器FreqFluorescenceFALS SensorFluorescence detector(PMT3, PMT4 etc.) Two-Color Cell AnalysisWhich of the three populations has the most Ab A binding sites?Ab AAb B 现代流式细胞仪包括—液流系统 聚焦细胞以供检测—光学系统 激发和收集光信号 —电子系统 将光信号转化为电信号，并使其数字化以供计算机分析 液流系统—液流系统将样本悬液聚焦在光源的中心处 Sample Flow in Optical CuvetteSampleLaminarFlowLow Sample Flow Rate12 L/minSheathSheathSampl...