免疫双向扩散实验(2 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。双向扩散法—抗原分析【原理】 双向扩散法是指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散而形成一定类型沉淀线的方法。沉淀线的特征与位置不仅取决于抗原抗体的特异性及相互间浓度比例，而且与其分子大小及扩散速度相关。当抗原抗体存在多种系统时，可呈现多条沉淀线以至交叉反应。 【材料】 生理盐水 1%琼脂管（每管约 4ml） 载玻片 打孔器及打孔模板 微量加样器及塑料吸头 抗体及抗原 1、2、3、4、5、6。 湿盒 【方法】 1．将已溶化的 1%琼脂盐水管放 56~60℃水浴箱中平衡温度备用。 2．将载玻片置于水平桌面上，倾注已溶化琼脂 3.5~4ml，使成厚度约 1.5mm 琼脂板。 3．凝固后，将打孔模板置于琼脂板下，然后用打孔器打孔，根据不同需要可制成三角型、方阵型或梅花型。本次实验采纳三角型，即每一个三角型的三个孔为一组。（因本次实验所制备的琼脂板均以载玻片为底板故根据其大小只能采纳三角型同时每一琼脂板也只能制成两组。否则，如采纳方阵型或梅花型则因琼脂板边缘琼脂厚度不够而使周边各孔所加抗原或抗体量不足或溢出，如制成三角型三组，因各孔相距过近相互渗透扩散而难于正确判定结果）。 4．用微量加样器加抗体各 10μl。各组所余两孔各按抗原 1、2 为一组，3、4 为二组，5、6 为三组，分别各加入 10μl。注意每加一样品均需更换加样器塑料吸头，以防止交叉现象影响实验结果。 5．作好记录，放湿盒中，置 37℃温箱，24 小时后观察结果。 【结果】 说明： （1）融合性沉淀弧，说明两孔中抗原相同，为同一性反应。 （2）两沉淀线独自形成并形成交叉，说明两孔中的抗原完全不同，为非同一性反应。 （3）融合性沉淀弧出现支线，或同时有另一条或两条沉淀线，说明两孔中抗原有相同部分又有不同部分，此为部分同一性反应。 单向免疫扩散法（Single radil immunodiffusion）—正常人群 IgG 正常值检测【原理】 在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加入定量的抗原，当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，既形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即可用以定量检测未知标本的抗原浓度（mg/ml 或 IU/ml）。 应用这一实验方法可检测正常人群或患者血清中 IgG、IgA 及 IgM 的含量及正常值。 【材料】 1．示教部分： 2%离子琼脂或生理盐水...
