叶绿体的分离和观察(3 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。生命科学学院Life Science College细胞生物学实验报告姓名：柳伟雄 班级：2025级生科一班学号：202500140062 同组者：曾玮璠 山东大学实验报告 2025 年 5 月 10 日 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班 2025 级 同组者：曾玮璠科目：细胞生物学实验 题目：叶绿体的分离和观察 一、目的和要求1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法二、原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。一次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。叶绿体的分离应在等身溶液（0.35mol/L 氯化钠或 0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体损伤。将匀浆液在 1000r/min 的条件下离心 2 分钟，以去除其中的组织残渣和未被破裂的完整细胞。然后，在 3000r/min 的条件下离心 5 分钟，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。分离过程最好在 0℃—5℃的条件下进行；假如在室温下，要迅速分离和观察。利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载玻片、盖玻片和无荧光油。三、试剂和器材1.材料：新奇菠菜2.试剂：（1）0.35mol/L 氯化钠溶液（2）0.01%吖啶橙（acridine orange）3、器材：（1）主要设备：普通离心机，组织捣碎机，粗天平，荧光显微镜（2）小型器材：500ml 烧杯 2 个，250ml 量筒 1 个，滴管 20 支，10ml 刻度离心管 20支，试管架 5 个，纱布若干，无荧光载玻片和盖玻片各 4 片等四、实验步骤1.选取新奇的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称 30g 于 150ml 0.35mol/LNaCl 溶液中，装入组织捣碎机2.利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆 2—3 分钟3.将匀浆用 6 层纱布过滤于 500ml 烧杯中4.取滤液 4ml 在 1000r/min 下离心 2min，弃去沉淀5.将上清液在 3000r/min 下离心 ...
