巨噬细胞功能检测(4 页)Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。单核－巨噬细胞吞噬功能测定单核－巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要作用，因此，检测单核－巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体外法）1、原理巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数，以此推断巨噬细胞的吞噬功能，从而评价机体的免疫状态。2、方法 (1)．小鼠巨噬细胞制备 实验前三天每只小鼠腹腔注射 1％可溶性淀粉 1 ml。实验时眼球放血、断椎处死小鼠，碘酒、洒精消毒皮肤，剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一小口(注意避开血管)用生理盐水(或 1640)灌注腹腔，收集腹腔液于试管中(约 4 ml)，1500 r/min，离心 10 min，去上清，沉积细胞用生理盐水(或 1640)洗二次，离心转速、时间同上。最后沉积细胞用含 10％小牛血清 1640 配成适当浓度备用(1~2×106／ml)。 (2)被吞噬物的制备 1）．鸡红细胞制备 从鸡翼下抽取静脉血，加入 5 倍量Alsever 液(2.05 g 葡萄糖，0.42 g NaCl，0.8 g 枸橼酸钠 5H2O、0.55 g 枸椽酸，加双蒸水到 100 ml，加热溶解后过滤分装，8 磅高压灭菌，4℃保存)，置 4℃可以保存 1个月。用前取适量鸡红细胞悬液，用 PBS 洗涤二次后配成1％的浓度备用。 2）．白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿培育基中，培育 48 小时，收集菌，用适量生理盐水配成悬液，100℃，煮沸 30 min 灭活，离心去掉上清，再用 1％美兰染色 30 min，用生理盐水洗涤二次，用生理盐水配成1×108／ml 菌悬液，4℃冰箱保存备用。 3、操作 取巨噬细胞 0.5 ml 加 1％鸡红细胞或 l×l08／ml 白色念珠菌悬液 0.5ml，置 37℃温育 30min。取 2 滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察计数，或离心 1000r／min,10min，取细胞沉淀混悬液制成涂片，甲醇固定，姬姆萨染色、油镜观察计数。吞噬率％=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100 个巨噬细胞)×100％吞噬指数％=100 个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞总数/100 个巨噬细胞 **(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)（三）小鼠巨噬细胞吞噬功能试验（体内法） [原理] 巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，通常选用鸡红细胞作为吞噬颗粒，将其注入小鼠腹腔中，腹腔中巨噬...
