植物组织氨基酸含量得测定(改良得茚三酮比色法）一、实验原理 植物吸收得氮主要就就是氨态氮与硝态氮,后者经过还原过程形成氨,前者经同化后形成谷氨酰胺与谷氨酸,然后形成其她氨基酸与蛋白质。测定氨态氮得方法有多种，本实验为改良得茚三酮比色法。 α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热,经氧化脱氨变成相应得α－酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原,在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨与另一分子水合茚三酮反应,缩合生成蓝紫色物质。根据蓝紫色得深浅,在 580nm 波长下测定吸光值。本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇与丙醇,可以克服茚三酮得不稳定性。二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1、 10％醋酸(10 ０ m Ｌ)2、 1% 抗坏血酸(100 ｍ L)3、 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液(0.０ 0 ５ g 定容至 1 ０ 00mL）4、 ｐ H5、４醋酸缓冲液：８、8mL 0、2 ｍ o ｌ/Ｌ 醋酸(冰醋酸 11、5 ５ mL 稀释至１ 00 ０ mL)加 41、２ｍ L ０、2mol/Ｌ醋酸钠(醋酸钠 16．4g 或三水醋酸钠 27.2g 配成 1 ０ 00mL）。5、 水合茚三酮试剂：１.1g 茚三酮放到烧杯中,加入 15 ｍＬ正丙醇，摇匀，溶解,后加入 30 ｍ l 正丁醇与 6 ０ｍ l 乙二醇,混匀,再加 9 ｍL pH5、4 醋酸缓冲液,混匀。保存于棕色瓶中,冰箱保存,适用期限 1０天。四、操作步骤1、 标准曲线得绘制 以下表所示量从 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至 2mL,对比仅加 2mL 蒸馏水,后在各试管中加入３ m Ｌ 水合茚三酮试剂与 0、１ mL 1%抗坏血酸,摇匀。盖上试管塞，于沸水中加热 15 分钟，取出后搅拌冷却 15分钟。冷却后得有色溶液中加无水乙醇至１ 0mL,在波长５ 8 ０ｎ m 处测吸光值,以氨态氮浓度（μ ｇ／mL)为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线。试管号 １ 2 3 4 5 ６ ７试剂（mL） 0 0、２ 0、４ 0、8 １、2 1、6 １、８氨态氮浓度 0 ０、５ １ ２ 3 4 ５(μg/mL)2. 称取０.5g 新奇植物材料，放入研钵中,加入５ mL 10%醋酸,研磨后以蒸馏水稀释至 1 ０ 0mL ,混匀,通过滤纸过滤,弃去最先滤下得一部分滤液后过滤到 10 ０ m Ｌ三角瓶中。3. 从剩下得滤液中取２ m Ｌ 放入试管中，加 3mL 水合茚三酮试剂与０、1mL 1％抗坏血酸,摇匀。盖上试管塞,于...
