PCR-反向点杂交法检测 HBV 基因型和耐药突变的应用讨论讨论目的：对 HBV 基因型(国内最常见的 B、C 和 D 三种型别)及 4 种核苷(酸)类药物的耐药突变位点(野生型：rt180L、rt204M、rt207M、rt207V、rt181A、rt236N;突变型：rt180M、rt204V、rt204I、rt207I、rt181V、rt236T)进行检测,以了解 HBV 基因型别分布情况、HBV 耐药突变情况、HBV 患者或携带者耐药情况、HBV 基因型别与 HBV DNA 载量的关系以及 PCR-反向点杂交法检测 HBV 基因型和耐药突变的方法学性能。讨论方法：采纳 PCR-反向点杂交法对 2025 年 10 月-2025 年 9 月期间在我院门诊和住院的接受核苷(酸)类药物治疗的 424 例乙型肝炎患者或携带者进行 HBV 基因型和耐药突变位点检测,并随机抽取 50 例经 PCR-反向点杂交法检测为阳性的标本进行 DNA 序列测定,以评价 PCR-反向点杂交法检测 HBV 基因型和耐药突变的方法学性能。数据统计学分析采纳 SPSS19.0 软件。讨论结果：在 424 例乙肝患者或携带者中,检出基因型别 364 例,未检出基因型别 60 例,其中有 5 例未检出基因型别,但检出野生型位点。HBV B 型 250 例(58.96%),HBVC 型 92 例(21.07%),HBV D 型 1 例(0.24%),HBVB/C 混合型 13 例(3.07%),HBVB/D 混合型 8 例(1.89%)。检出耐药突变位点的有 76 例,rt180M 检出率 21.30%,rt204V 检出率 24.07%,rt204I 检出率33.33%,rt181V 检出率 11.11%,rt236T 检出率 8.33%。对核苷(酸)类药物的耐药情况,B 型耐药的有 37 例,其耐药率为 40.22%,C 型耐药的有 17 例,其耐药率为 18.48%；B/C 混合型耐药 9 例,其耐药率为 69.23%；B/D 混合型耐药 4 例,其耐药率为 80.00%,经 x2 检验 B 和 C 型两组病例的耐药情况(x2=9.694,P=0.0021,P<0.05),差异具有统计学意义。B、C 型的 HBV DNA载量(Log10)分别为 5.69±1.70 和 5.79±1.51,无明显差异(t=-0.449,P>0.05)。与 DNA 测序法比较,PCR-RDB 法检测 HBV 基因型和耐药突变基因的敏感度、特异度和准确度为 98.19%、100%、99.56%,阳性预测值为 100%、阴性预测值为99.41%、阳性似然比为∞、阴性似然比为 0.018,两种方法检测结果一致性极好(Kappa 值为 0.958),符合率为 98.12%(109/111),差异无统计学意义(χ2=45.97,p=0.000)。讨论结论：1、HBV 感染以 HBV B 和 HBV C 型为主,同时存在一定比例的 B/C、B/D 混合型,耐药突变位点检出率从高到低依次为rt204I、rt204V、rt180M、rt181V、rt236T、rt207I。2、HBV B、C 型对核苷(酸)类药物的耐药情况存在差异,前者高于后者。对二种药物联合耐药者发生率高,但三重耐药者不多。3、HBV B 和 C 型患者 HBV DNA 载量无明显差异。4、PCR-反向点杂交法检测HBV 基因型和耐药突变基因位点的敏感度、特异度和准确度都能满足临床检测要求,且操作简便,结果快速,适合临床实验室使用。
