冰冻切片的制备VIP专享

冰冻切片组织的制备:固定 将组织置于 4%多聚甲醛固定液中，4℃摇床过夜。漂洗 将固定后的标本用 1X PBS 漂洗三次，每次 15 分钟。脱水 将组织置于 30%蔗糖溶液中，4℃摇床过夜。第二天观察是否脱水完全，推断的标准是，当管竖直时，组织是否沉到蔗糖溶液的底部，若组织已完全沉降到蔗糖溶液的底部，平放或震荡后仍能沉降，则可推断组织已脱水完全。包埋 将组织倒入培育皿中，用眼科刀将脑和脊髓根据切片切面的需要在不同的部位切开，并做好头尾端的标记。之后将组织置于包埋盒中，用滤纸吸干组织周围多余的蔗糖溶液，滴加 OCT（optimal cutting temperature compound）到包埋盒中，用移液枪头小心的将组织周围的 O.C.T 混匀，切忌起气泡，静止 10 分钟，以防切片时脱片。重新取一个包埋盒，将组织移入到包埋盒中，倒入 OCT，再次用移液枪头将组织与 O.C.T 混匀，将组织按切片需要方向摆放于包埋盒的底部，迅速置于干冰与酒精的混合物中。在包埋盒上做好标记，用保鲜膜和锡纸包好后放入-80℃冰箱贮藏待切。切片：切片前先将切片机的箱体温度及刀头温度均设为-20℃，把包埋盒从-80℃冰箱取出置于切片机中平衡半小时左右。之后将包埋块用O.C.T 固定在样品托上，然后将样品托固定在样品头上，调整合适的位置，以使样品与刀头处于平行位置。手动切片。用细毛笔将切片均匀整齐地平铺在明胶包被的载玻片上，室温下晾片 30min-1h 后进行免疫组化染色。冰冻切片的快速染色法 冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定 1分钟后即可染色。以往，为了防止切片脱落，当切片附贴于载玻片后，即用电吹风吹干后再固定。根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片，强热作用后，蛋白发生变性，核内含有的物质由于热的作用融合在一起，染色后镜下分辨不出核内的各种物质。冰冻切片附贴于载玻片后，立即放入恒冷箱中的固定液固定，这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固定起来，核染色质清楚，核仁明显，其他物质都完好保存。 方法： 1. 切片固定 1 分钟。 2. 水洗（肉眼观察，洗净即可）。 3. 染苏木素 5 分钟。 4. 1%盐酸酒精分化。 5. 于碱水中返蓝 10 秒。 6. 伊红染色 10 秒。 7. 脱水，透明，中性树胶封固。 冰冻组织 1－2 分钟，切片 1 分钟，固定 1 分钟，染色共五分钟。总共在 10 分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。 冰冻切片的方法还有很...