第四节 酶的固定化1．说出固定化酶和固定化细胞的作用和原理。2．尝试制备固定化大肠杆菌细胞。一、酶的固定化1．固定化酶概念：通过物理或化学的方法，将水溶性的酶与不溶性的载体结合，使酶固定在载体上，并在一定的空间范围内进行催化反应，这样制成的酶称为固定化酶。2．酶的固定化方法共价键结合法：将酶通过化学反应以共价键结合到尼龙等载体上。包埋法：将酶均匀包埋在琼脂糖凝胶等多孔性的凝胶中的固定化方法。3．固定化酶的特点活性稳定，可以反复使用多次。在生产中，固定化酶能与反应液相互分开，不与产品混合，制品较易纯化，在大规模生产时所需工艺设备简单易行。4．固定化酶的实例：木瓜蛋白酶的固定化（1）酶的固定化。在啤酒生产过程中，刚酿制的啤酒往往含有少量的蛋白质而显得浑浊。加入木瓜蛋白酶，可以使蛋白质水解成氨基酸，供酵母菌增殖所需，从而缩短发酵时间，提高啤酒产量，使酒质澄清醇和。将尼龙布浸入等体积的 CaCl2 溶液和甲醇溶液中，室温下放置 10 s 左右，并轻轻搅拌至尼龙布发黏。取出后用水冲洗，并用吸水纸吸干。将尼龙布放入盐酸中，室温下水解，用蒸馏水洗至 pH 中性。再将尼龙布放入戊二醛溶液中，室温下浸泡 20 min。取出后用磷酸缓冲液（pH＝7.8）反复洗涤，洗去多余的戊二醛，吸干后立即放入木瓜蛋白酶 溶液中，4 ℃下固定3.5 h。取出尼龙布后用 NaCl 溶液洗去多余的蛋白酶，即得到尼龙固定化酶。为防止改变酶的电荷，操作过程中不能使用金属镊子。（2）检验酶的活性。（3）酶的再利用。二、细胞的固定化1．细胞固定化技术利用适当的载体将合成酶的细胞固定起来。固定化细胞比固定化酶更简捷，使用寿命更长。2．大肠杆菌细胞的固定化可以用液体培养基培养大肠杆菌，取菌液加入生理盐水和琼脂，搅拌均匀，待琼脂凝胶凝固后，切成小块，用生理盐水和蒸馏水洗净，即得到固定化的大肠杆菌细胞。1．直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的比较直接使用酶固定化酶固定化细胞酶的种类一种或几种一种一系列酶常用载体—高岭土、皂土、硅胶、凝胶明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺制作方法—共价键结合法、物理吸附法包埋法是否需要营养物质否否是催化反应单一或多种单一一系列反应底物各种物质（大分子、小分子）各种物质（大分子、小分子）小分子物质优点催化效率高，低耗能、低污染等酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用成本低，操作更...
