线虫开放实验-实验攻略

线虫开放实验的补充说明1. 培育基倒培育基一定在超净台中完成，注意无菌操作，平板不能高压灭菌，会变形。2. 线虫的食物滴菌同样在超净台中完成，菌滴于平板中央（防止线虫爬到平板边缘干死丢了），并且要进行测试无杂菌才可大规模使用，污染杂菌会影响观察和统计记录。3. 线虫的生活史和表型观察（重要）“磨刀不误砍柴工”这两部分是整个线虫遗传实验最重要的基本知识。需要记录并熟悉线虫的生活史。熟知不同阶段的线虫（特别是 L4 和 adult），区分雌雄同体线虫（hermaphrodite）和雄虫（male），识别典型的突变体：unc 和 dpy。4. 线虫的基本实验操作（重要）熟练使用 picker(自制铂金丝小铲)，达到如下要求：1） 注意操作迅速，洁净，不污染杂菌，及时烧 picker，防止交叉污染虫子和卵；2） 两种方法“挑”和“粘”。“挑”：在解剖镜下找到目标线虫后，用picker 末端在线虫的附近压琼脂培育基，使线虫爬到 picker 上再转移到新的平板中；“粘”：用 picker 末端蘸取少量 OP50，轻轻地而且快速的碰触线虫的上部，线虫被 picker 上的菌液粘住。3） 用“挑”法时，往新的平板放线虫时，注意要慢慢降低 picker 末端，轻轻接触琼脂平面或菌苔边缘等线虫爬出来，不要将琼脂戳破，否则线虫喜爱钻入琼脂中，4） 转移虫子不挑破培育基，不使虫子被挑死；假如是用“粘”法，直接将picker 底部粘上的菌液线虫放到新平板的菌苔边缘即可。3）挑虫准确性强，不顺带别的虫子和卵；4） 要做到“挑的起”，“放的下”，掌握挑虫技巧。5. 线虫的遗传实验技巧1） 掌握 mating 时期：充分利用 L4 的特点，使用 L4 早期的雌雄同体的虫子进行交配。2） 铺 op50 食物菌斑时，建议铺菌斑较小的平板作为 mating plate，提高交配效率，另外雄虫比例较高时也可提高交配效率。一般雄虫：雌雄同体为 3：1 至 4：1 能有不错的交配效率，当雌雄同体为比较弱的突变体时，建议增加雌雄同体的量，以防止某些母本产卵少或不产卵，导致交配后代很少。尤其是在做测交需统计下代各种线虫的表型时，更要保证有足够多的交配后代可以统计。3） Mating 时，准确记录亲本数目，一定在 F1（子一代）到 L4 之前处死P0(亲本)中的雄虫，防止回交，并且之后及时处理 P0 中的雌雄同体虫和长大的 F1（有的实验需要及早 clone out，单虫单盘培育）,防止影响统计的准确性。4） 利用线虫生长速度合理安排时间，比如 15℃生长较慢，25℃生...