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蛋白透析复性方法

蛋白透析复性方法_第1页
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蛋白透析实验使用前处理: 1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2. 在大体积的 2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸 10分钟。 3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸 10 分钟。 5. 冷却后,存放于 4 度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗洁净。首先用透析液 TGE 将样品稀释一倍,将其装入透析袋中,放入 500mlTGE 中放入 4 度冰箱即可。每7、8 小时换一次透析液,总透析时间从 24-48 小时不等。TGE 配法如下:50mM Tris0.5mM EDTA50mM Nacl5%或 10%甘油假如有条件加入 1%的甘氨酸或精氨酸和谷胱甘肽会更好些。谷胱甘肽的浓度:氧化型:0.05mM 还原型:0.5mM。调 ph 值 7.9 或 8.0 或其他,根据你的蛋白的等电点来确定,别离等电点太近,否则会出现大量沉淀,甚至目的蛋白全部沉掉,我最大 ph 用过 9.0。

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