案例一：某特定化合物系强极性有机小分子,极性大、难挥发，采纳硅胶柱层析不易提纯，需用其他分离技术来纯化。解决方法：终极目的是提纯该物质。总体策略——“先看，后想，再行动”-—“看化学结构,想理化性质，定纯化方法。由于该化合物及相关杂质的理化性质决定了难以用常规的重结晶、蒸馏（精馏)、硅胶柱层析来分离纯化。结合实验室的具体条件,考虑采纳反相制备型。高效液相色谱法（Preparative HPLC）来分离纯化之。方法步骤：1.了解样品及有关组分的情况→2。样品预处理→3。建立Analytical HPLCMethod→4。优化Preparative HPLC 条件→5.检查出现的问题→6。回收纯化的物质。 更细致地来讲，开始Preparative HPLC 之前须明白：待分离样品及有关组分的信息——所含化合物的结构信息（重点关注酸、碱性等极性基团）、UV 光谱图(涉及到后续试验检测波长设定）、分子量(分离后目标化合物LC-MS 检测确认）、待分离体系的复杂程度（所含化合物的数目，preparative HPLC 之前是否须经flash column 粗分）； 样品预处理——最主要的是样品的溶解度（将尽量多的样品溶于体积相对较小的溶液中）以及待分离体系里是否含强酸、强碱性物质（潜在的“柱杀手"),样品溶液是否需要中和等；建立Analytical HPLC Method——这一步，跟平常的HPLC 相似，重点关注待分离的目标化合物，使该物质与其前、后组分分离得尽量相隔远些（起码得基线分离，利于后续制备时放大），若流动相中必须添加改性剂,应尽量避开非挥发性的缓冲盐,优先选择易挥发性缓冲液（例如甲酸、乙酸、三氟乙酸、甲酸铵、乙酸铵、三乙胺、氨水等），否则要脱盐，得二次分离； 优化Preparative HPLC 条件——通常来讲，制备柱是实验室现有的（色谱柱就这么定下来了，没得选择的余地，除非是需新购色谱柱），在Analytical HPLC 的基础上优化梯度分离方法、考察进样量、目标组分收集确认（LC—MS 测分子量）； 检查出现的问题—— 这一步是最需要费心留神的!很多时候，出了问题，根本就没有挽回的余地，当然了，有时也是亡羊补牢，犹为未晚;所以，更多的时候，是需要未雨绸缪，把可能会发生的事情尽量考虑周全！比如样品的溶解度（在甲醇、水、乙腈、流动相、四氢呋喃那、酸水、碱水中的溶解性如何？），若样品溶解性不好,第一步就卡住，很打击人滴！曾遇到过这么个实例—-一个某种酶抑制剂,含氮杂环类化合物,在上面提到的那些溶剂中溶解度都相当地小，analytical HPLC ...
