凯氏定氮操作步骤1．消化:精密称取大豆样品 1.0g 左右，放入干燥的 250 ml 消化管中,加入0.4g CuSO4、7g K2SO4、10ml H2SO4。先 200℃炭化,待泡沫停止后提高温度到 450℃,加热至液体沸腾，待瓶内液体呈蓝绿色透明后，再继续加热0。5h。冷却后加入 20ml 水，移入 100ml 容量瓶中，用少量水洗涤消化管2~3 次，洗液合并于容量瓶中定容2．蒸馏:连接凯氏定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至 2/3 处，加甲基红指示剂数滴及数 ml 硫酸，保持水呈酸性。加入数粒玻璃珠以防暴沸，调节火力加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。3．吸收：向吸收瓶内加入 20g/L 硼酸溶液 20ml 及混合指示剂 2 滴,并使冷凝管下端插入液面以下，吸取 10ml 样品消化稀释液由进样口进入反应室，并以 10ml 水洗涤进样口使其流入反应室内，将 400g/L NaOH 溶液 10ml 倒入进样口,立即夹紧螺旋夹,并加入少量蒸馏水，密封进样口。当蒸汽通入反应室时，准确计时，反应产生的氨气通过冷凝管进入吸收瓶，蒸馏 5min，移动吸收瓶，使冷凝管下端离开液面,再蒸馏 1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部,取下吸收瓶.洗涤:停止加热，使反应室内的液体进入汽水分离器，打开进样口的螺旋夹，将汽水分离器的液体放出。再向反应室内加入蒸馏水，夹紧螺旋夹，再次进行加热至水蒸汽放出,停止加热，使反应室内的水进入汽水分离器，进行洗涤。4．滴定:用 0.025mol/L 硫酸标准溶液滴定吸收液至灰色。5．计算： X＝2cV×14×5.71/mX 为样品中蛋白质的含量,％;c 为硫酸标准溶液的浓度,mol/L;V 为样品消化液消耗硫酸标准溶液的体积，ml；m 为样品的质量,g。凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定蛋白质的国标方法。2%硼酸溶液是测定方法中碱化蒸馏时所使用的吸收液，用来吸收游离出的氨，然后用盐酸或硫酸标准溶液滴定，根据混合指示剂颜色变化推断终点. 1 试剂与方法 1。1 2%硼酸吸收液的配制方法 （1）将 2 份 0。1％甲基红乙醇溶液与1 份 0。1%次甲基蓝乙醇溶液混合。（2)将适量上述混合指示剂一次性加入已配制好的 2%硼酸溶液中，使溶液呈蓝紫色。 1。2 2%硼酸吸收液使用方法 根据国标方法（GB5009.5―85）操作，在平行试验时，可将已滴定至终点的 2%硼酸吸收液重复使用。 1。3 配制方法 配制 2％硼酸吸收液时，混合指示剂加入量不宜过多，以透过试剂瓶观察蓝紫色刚好透明为宜。若溶液偏蓝,用 0。1％甲基红乙醇溶液调至蓝紫色；反之若偏紫红，可用 0.1％次...
