动物细胞工程 12 月 20 日动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培育、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培育技术是其他动物细胞工程技术的基础.一、动物细胞培育1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培育基中，让这些细胞生长和增殖。2、原理：细胞增殖3、过程注意:①10 代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。② 超过 50 代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50 代，细胞不再增殖,全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。③ 分瓶之前，称原代培育;出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培育为传代培育。思考回答:⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培育？答：其细胞的分化程度低,增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培育。⑵、动物细胞培育需要脱分化吗？为什么?答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培育的脱分化过程,要想使培育的动物细胞定向分化，通常采纳定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。⑶、进行动物细胞传代培育时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗? 答： 主要是蛋白质,不行，因为胃蛋白酶作用的适宜 PH 约为 2，当ＰＨ大于 6 时就会失去活性，多数动物细胞培育适宜 PH 为 7。2－7.4,胃蛋白酶在此环境中没有活性。（胰蛋白酶作用的适宜 PH 为 7。2－8.4,胰蛋白酶活性较高）⑷、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么?答：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质，长时间作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤，因此必须控制好消化时间。⑸、动物细胞培育能否像绿色植物组织培育那样最终培育成新个体？不能，动物细胞培育只能使细胞数目增多,不能发育成新的动物个体4、重要概念① 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁.产生原因：培育贴附性细胞时，细胞要能够贴附于底物上才能生长增殖。培育要求：培育瓶或培育皿内表面光滑、无毒，易于贴附。② 细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。③ 原代培育:动物组织消化后的初次培育④ 传代培育：原代培育的细胞由于接触抑制不再分裂,需要重新用胰蛋白酶等处理,然后分瓶继续培育，让细胞继续增殖，这种培育叫传代培育.5、...
