第 13 课时 DNA 的粗提取与鉴定[学习导航] 1.通过阅读教材 P54“基础知识”,掌握提取并检验 DNA 的原理和方法。2.结合教材 P55“实验设计”,掌握 DNA 粗提取的选材、析出及鉴定。3.结合教材 P56“操作提示”,掌握实验过程中需注意的问题。4.分析教材 P57“结果分析与评价”中的问题,掌握 DNA 粗提取与鉴定的技术。[重难点击] 1.理解 DNA 的理化特性及根据其理化特性而提取和鉴定的原理。 2.初步掌握DNA 的粗提取和鉴定方法。一、DNA 的理化特性、提取及鉴定的原理1.提取 DNA 的方法和原理(1)提取生物大分子的基本思路:选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。(2)提取 DNA 的方法:利用 DNA 与 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。2.DNA 的溶解性(1)DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中的溶解度不同,其中在 0.14 mol/LNaCl 溶液中溶解度最低。(2)在酒精溶液中的溶解性:DNA 不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精溶液。3.DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性(1)对酶的耐受性:蛋白酶能水解蛋白质,但对 DNA 没有影响。(2)对温度的耐受性:大多数蛋白质不能忍受 60 ~ 80 ℃ 的高温,而 DNA 在 80 ℃ 以上才会变性。(3)对洗涤剂的耐受性:洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对 DNA 没有影响。4.DNA 的鉴定在沸水浴的条件下,DNA 与二苯胺反应呈现蓝色。1.DNA 溶解性原理(1)结合 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度曲线,分析 DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中的溶解度有何特点。项目溶解规律2 mol/L NaCl 溶液0.14 mol/L NaCl 溶液DNA溶解析出蛋白质蛋 白 质 在 NaCl 溶 液 浓 度 从 2 部分发生盐析沉淀溶解mol/L 降低过程中,溶解度逐渐增大① 低于 0.14 mol/L 时:DNA 的溶解度随 NaCl 溶液物质的量浓度增加而逐渐降低 。② 高于 0.14 mol/L 时:DNA 的溶解度随 NaCl 溶液物质的量浓度增加而逐渐升高 。(2)结合图表分析,如何通过控制 NaCl 溶液的浓度使 DNA 在盐溶液中溶解或析出,以达到去除杂质的目的?答案 提取获得的 DNA 滤液中含有蛋白质、多糖和 RNA 等多种杂质,用 2 mol/L 的 NaCl 溶液溶解 DNA,然后过滤获得滤液,能够去除该条件下不能溶解的杂质;调节 NaCl 溶液的物质的量浓度为 0.14 mol/L,使 DNA 析出,然后过滤获得析出物...