专题 5 DNA 和蛋白质技术 课题 1 DNA 的粗提取与鉴定庖丁巧解牛知识•巧学 一、提取 DNA 的方法1
基本思路利用 DNA 与 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取 DNA,去除其他成分
DNA 的理化性质(1)DNA 的溶解性,DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同,此外,DNA 不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精
利用上述特点可达到分离 DNA 的目的
(2)DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性,蛋白酶能水解蛋白质,但是对 DNA 没有影响
大多数蛋白质不能忍受 60~80 ℃的高温,而 DNA 在 80 ℃以上才会变性
洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对 DNA 没有影响
要点提示 DNA 的溶解度与 NaCl 溶液浓度的关系:当 NaCl 溶液浓度低于0
14 mol/L时,随浓度的升高,DNA 的溶解度降低;当 NaCl 溶液浓度高于0
14 mol/L时,随浓度升高,DNA 的溶解度升高
DNA 的鉴定DNA 遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定D
知识拓展 蛋白质的溶解度与盐溶液浓度的关系:在中性盐溶液中,低浓度时,蛋白质的溶解度较高即盐溶现象;高浓度时,蛋白质的溶解度较低,并可析出即盐析现象
二、实验设计1
实验材料的选取一定要选取 DNA 含量较高的生物材料,否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难
破碎细胞,获取含 DNA 的滤液以动物细胞为实验材料时,破碎细胞较容易,例如,在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可
以植物细胞为材料时,充分研磨破坏了细胞壁,洗涤剂中的表面活性剂成分能够与膜蛋白结合从而破坏细胞膜,这些为核 DNA 的释放提供了通道
去除滤液中的杂质根据 DNA 的溶解