第一节 基因工程的原理1．简述基因工程的诞生。2．简述基因工程的原理及技术。3．尝试 DNA 的提取与鉴定。一、基因工程的诞生1．限制性内切酶——“基因手术刀”（1）作用：能够识别特定的脱氧核苷酸序列，并于特定位点上准确地切割双链 DNA。（2）结果：形成 DNA 黏性末端。2．DNA 连接酶——“基因缝纫针”（1）作用：将两个 DNA 片段连接起来，修复被限制性内切酶切开的切口，拼接成新的DNA 分子。（2）种类：T4DNA 连接酶（把限制性内切酶切开的黏性末端的缝隙“缝合”起来）。思考 将人的胰岛素基因导入大肠杆菌，大肠杆菌能够生产人的胰岛素，在基因操作中把人的基因与大肠杆菌的基因“缝合”起来的工具是什么？提示：DNA 连接酶。二、基因工程的一般程序1．基因工程的概念基因工程是指按照人们的意愿，将一种生物的基因在体外剪切，并与特殊的运载工具进行重新组合，然后转入另一种生物的体内进行扩增，并使之表达产生所需蛋白质的技术。2．基因工程的操作程序（1）DNA 分子的提取。（2）目的基因的获得。① 直接分离法：最常用的方法是“鸟枪法”，又称“霰弹法”。用限制性内切酶（子弹）切割 DNA，再用“核酸探针”（用放射性同位素或其他标记物标记的 RNA 单链 ）检测出目的基因，再用 PCR 仪 扩增 DNA，获得大量的目的基因。② 人工合成法：一种是反转录法。它是以目的基因的信使 RNA 为模板，借助反转录酶合成碱基互补的单链 DNA，然后在 DNA 聚合酶 的作用下合成双链 DNA。另一种方法是化学合成法。即依照某一蛋白质的氨基酸序列，通过密码子推导出其碱基序列，然后直接合成目的基因。（3）重组载体的构建。① 载体的特点：外源 DNA 的插入不影响载体在宿主细胞内的自我复制；有适宜的限制性内切酶酶切位点；具有某些标记基因；载体应对受体细胞无害。② 载体的种类。a．质粒：它是细菌中独立于细菌 DNA 之外的小型环状 DNA 分子。它含有一个至多个限制性内切酶切割位点，供外源基因插入其中，并带有特殊的遗传标记基因，是基因工程中最常用的载体。b．噬菌体或其他一些病毒。（4）重组载体的导入和筛选。① 转化：将带有目的基因的重组载体与相应的受体细胞放在一起培养，通过一定的方式诱导，它们会进入受体细胞，这一过程称为转化。② 转化的方法：基因枪法（被子植物）、花粉管通道法、显微注射法（动物）。③ 筛选：利用选择培养基把转化的细胞选择出来。（5）目的基因的表达和鉴定...
