1.3 测定微生物的数量单细胞微生物个体生长时间很短，很快进入繁殖阶段，生长和繁殖难以分开，个体生长很难测定，而且实际应用意义不大，因此，它们的生长不是依据细胞大小，而是以群体的生长作为单细胞微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法等。测量细胞物质的方法有细胞干重的测定、细胞某种成分如氮的含量、RNA 和 DNA 的含量测定、代谢产物的测定等。总之，测定方法很多，各有优缺点，工作中应根据具体情况加以选择。一.目的和要求1.了解微生物数量测定常用的方法和平板计数的原理。2. 掌握血球计数板计数的原理和显微镜直接计数的方法。3.掌握平板计数的方法和应用范围。二.基本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0．1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。血球计数板构造如图Ⅷ-1。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格（图Ⅷ-2）；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16个小方格（图Ⅷ-1，C）。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即 16×25=400 小方格。每一个大方格边长为 1mm，则每一大方格的面积为 1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为 0．1mm，所以计数室的容积为 0．1mm3。在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上 16 或 25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成 1ml 菌液中的总菌数。下面以一个大方格有 25 个中方格的计数板为例进行计算：设五个中 方 格 中 总 菌 数 为 A ， 菌 液 稀 释 倍 数 为 B ， 那 么 ， 一 个 大 方 格 中 的 总 菌 数 因1ml=1cm3=1000mm3，平板菌...
