选修 1 生物技术实践第一部分 微生物的利用（是重点）一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、教学要求：实验 1 大肠杆菌的培养和分离基本要求1， 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。2， 进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。说明实验 2 和实验 3 不作要求。三、考纲要求：知识内容要求（1）微生物的分离和培养掌握程度参考生物考试说明中的：1.考核目标与要求2. 实 验 与 探 究 能力。四、知识要点：1，细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。划线最后，可使细菌间的距离加大。看到划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已被分离。将接种后的固体培养基培养 10 ～ 20 小时 后，一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞，形成一个菌落，不会重叠。在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。由于工程菌的质粒中通常有抗性基因（如抗氨苄青霉素基因），如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。涂布分离时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释到 10-5～10-7之间，然后去 0.1ml 不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿中有 20 个以内的单菌落 为最合适。将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂。2．在培养微生物时，必须进行无菌操作。其首要条件是各种器皿必须是无菌的，通常用高压蒸汽灭菌法灭菌，烘干后在超净台上还要打开紫外灯和过滤风灭菌；各种培养基也必须是无菌的，转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌（防止杂菌污染）。进行恒温培养时，要将培养皿倒置，是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落见...
