组织学实习方法VIP专享VIP免费

第1页共71页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共71页一、组织学实习方法(一)如何正确使用显微镜观察组织标本1.对照图片，结合实物，熟悉显微镜的构件，掌握显微镜光学部分和机械部分的正确使用方法。2.将显微镜轻轻地移至观察者的前方，使镜座的前缘距实验台边缘大约5～10公分。3.旋开显微镜电源开关(显微镜座左后侧转轮)，光线亮度适当。4.旋转物镜‘转换器’，将10倍物镜旋至镜筒下方，对准‘载物台’中央的孔。5.打开‘聚光镜孔径光栏’，可见光线经‘集光镜’→‘聚光镜孔径光栏’→‘聚光镜’→‘载物台’中央的孔→10倍物镜→目镜。6.注意身体坐姿，睁开双眼，把观察注意力集中于显微镜的视场内，可见两个不完全重合的视场光斑，双手推移两目镜，使两光斑合二为一。第2页共71页第1页共71页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共71页7.按照实习指导和切片标本目录，从标本盒内取出要观察的标本，进行肉眼观察，初步了解该标本的大小、形状和染色等。8.将载玻片放在载物台上，盖玻片朝上，标签位右侧，用弹夹夹好。旋转‘弹夹移动旋钮’，将载玻片上的组织标本移至物镜下方。调节镜座左侧的转轮(即电源开关)，将视野亮度调至适中。在右手旋转‘弹夹移动旋钮’，移动切片的同时，左手慢慢地旋转镜臂下部的大、小‘手轮’聚焦(先旋大手轮后旋小手轮)。做到左、右手配合，双目观察标本。9.显微观察标本常规是从低倍放大开始，这样视场大，有利于对标本进行全面观察。使用低倍物镜(X10)时，观察者左手转动大手轮，使载物台缓慢上升或下降，同时，观察者用双眼从目镜中观察视场，当见到组织标本像轮廓时，转动小手轮直至组织标本像清晰。10.当要进一步放大观察时，则直接旋转物镜‘转换器’，将40倍物镜旋至镜筒下方。此时，只需转动小手轮调焦(必要时升降聚光器或调节聚光镜光栏的孔径)，便可获得更清晰的进一步放大的标本像。在不同切片和不同放大倍数下观察时，应注意随时调节亮度，使之最适宜。11.移动切片观察时，要注意片中组织标本与镜像方位完全相反。二维标本像与其多维的关系，详见切片物像的理解及图示。12.观察完一张切片后，应回忆总结一下在该片中辨认了几种细胞、组织、结构或该器官的特征性结构，每片如此积累，可以大大提高阅片能力和学习效率。(二)组织切片制作的一般过程目的要求★了解石蜡切片HE染色法的基本过程。★通过了解切片制作，加深对局部与整体，平面与立体关系的理解。常用的教学标本是石蜡切片，苏木精(hematoxylin，以H代表)和伊红(eosin，以E代表)染色，即HE染色。现将其制作方法简述于下：1.取材与固定取材愈新鲜愈好，材料大小以0.5cm3为宜，放入固定剂内，固定6～24小时。固定的目的是使细胞内的蛋白质凝固，以便保持组织原来的结构和成分。但是，经固定后组织的结构与生活状态下的结构仍有很大差异，可能造成“人工假象”。常用的固定剂有多种，兹例举两种如下。(1)10%福尔马林(formalin)取37～40%甲醛水溶液10毫升，加入水90毫升，即配成10%福尔马林。多用于大块组织的固定，如外科手术取的材料。组织块大小与固定剂体积之比，一般为1∶20。(2)Bouin液是一种混合固定剂，取饱和苦味酸水溶液75毫升、37～40%甲醛水溶液25毫升和冰乙酸5毫升，三者混合均匀并过滤。临用前配成。以含苦味酸的固定剂固定的组织标本，需经70%酒精充分洗涤，尽量除去苦味酸对组织的黄染。2.脱水组织标本需包埋在硬的石蜡内才能切成薄片，但是，经固定后的组织内含有水，石蜡不能透入，故需脱水。常用的脱水剂是酒精。为避免组织突然进入无水酒精内产第3页共71页第2页共71页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共71页生强烈收缩，需采用升梯度酒精(70%→80%→90%→95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ)，在不同浓度酒精内的时间长短，则视组织块大小而定。3.透明组织标本经酒精脱水后，其内含有酒精，酒精与石蜡仍互不相溶，故组织标本还需进行透明处理。透明是用既能与酒精又能与石蜡溶合的透明剂(常用二甲苯)渗入组织内，完全渗透后，组织呈透明状，即可将组织浸泡在预温、溶化的...